بررسی قابلیت زیست پالایی باكتری‎های جداسازی شده از خاك‏های آلوده به تركیبات نفتی با استفاده از كروماتوگرافی گازی

آلودگی‎های نفتی كه عمدتا به دلیل استخراج، پالایش و حمل و نقل نفت رخ می‎دهند، به ویژه در كشورهای نفت خیزی همچون ایران یك مشكل اجتناب ناپذیر محسوب می‎شوند. جهت رفع این آلودگی‎ها، تكنیك‎های موثر، آسان و كم هزینه‎ای مثل زیست پالایی مورد استفاده قرار می‌گیرد. هدف این پژوهش نیز جداسازی و شناسایی باكتری‌های موثر در زیست‌پالایی خاك‎های آلوده به تركیبات نفتی است. به همین منظور، از یك نمونه نفت سفید، 3 نمونه خاك آلوده به نفت خام، گازوئیل و نفت كوره، و 2 نمونه خاك اطراف پالایشگاه شیراز كه آلودگی ظاهری در آن وجود نداشت جهت جداسازی باكتری‌های تجزیه كننده نفت استفاده شد. از بین كلونی‎های جداسازی شده 7 ایزوله برای آزمایش‎های بعدی انتخاب شدند. ایزوله‎ها در محیط حداقل SSM كه در آن منبع كربن حذف و نفت سفید 5/2% جایگزین شده بود كشت شدند. پس از آن جهت بررسی توانایی رشد ایزوله‎ها در غلظت نفت بالاتر، كشت در محیط SSM كه منبع كربن، گوگرد یا نیتروژن حذف شده و نفت سفید با غلظت 20% اضافه شده بود انجام شد. پس از بررسی میزان رشد ایزوله‎ها در محیط‌های ذكر شده با اسپكتروفوتومتر و تجزیه و تحلیل با مقایسه میانگین، ایزوله‎های C4، C2 كه هر دو از خاك آلوده به نفت خام جداسازی شده بودند، و ایزوله‎های SI1 و SI2 كه هر دو از خاك اطراف پالایشگاه منطقه 1 جداسازی شده بودند، جهت بررسی میزان توانایی تجزیه نفت سفید برای آزمون كروماتوگرافی گازی انتخاب شدند. نتایج كروماتوگرافی گازی نشان داد كه C2 08/69%، C4 69/47%، SI1 44/42%، و SI2 24/38% نفت سفید با غلظت 5% را در مدت 7 روز تجزیه كردند. در نهایت ایزوله‎ها با آزمون‎های بیوشیمیایی، كیت شناسایی API20E و آنالیز ژن 16S rRNA شناسایی شدند و مشخص شد كه C2، C4 و SI2 به ترتیب متعلق به گونه‏های Citrobacter sedlakii، Entrobacter hormeachei، و Entrobacter cloacae می‏باشند.