بيان آنزيم فعال بتا-گلوكورونيداز در بذر گياه توتون

هدف: طراحي و تهيه سازه ژني مناسب و انتقال آن به گياه توتون و بررسي گياهان تراريخت حاصله بوده است.مواد و روش‌ها: سازه اختصاصي بذر حاوي پيشبرنده Napin، توالي Ω ، ژن GUS و توالي SAR در پلاسميد pBI121 طراحي و تهيه و در باكتري E. coli تكثير شد. ريزنمونه‌هاي برگي توتون با آگروباكتريوم سويه LBA4404 به‫روش استاندارد تلقيح شدند. گزينش جوانه‌هاي باززايي شده در محيط انتخابي (شامل MS، mg/l  0/1 NAA،  mg/l3 BAP ،mg/L 25 كانامايسين، mg/L 200 سفوتاكسيم) انجام شد. آناليز گياهان تراريخت با PCR، RT-PCR و آزمون هيستوشيميايي انجام شد.نتايج: بررسي مولكولي گياهان باززايي شده با PCR و آغازگرهاي اختصاصي ژن‌هاي nptII و GUS نشان‌دهنده انتقال اين ژن‌ها به گياه‫چه‌هاي باززايي شده بود. نتايج RT-PCR نشان داد كه نسخه‌برداري از ژن nptII در هر دو بافت برگ و بذر صورت مي‌گيرد در حاليكه نسخه‌برداري از ژن GUS تنها در بذر صورت مي‌گيرد. با توجه به اينكه پيشبرنده NOS (كنترل‌كننده ژن nptII) عمومي و Napin (كنترل‌كننده ژن GUS) يك پيشبرنده اختصاصي بذر مي‌باشد، اين نتيجه مورد انتظار بود. در نهايت با استفاده از SDS-PAGE و آزمون هيستوشيميايي، توليد و فعاليت آنزيم بتاگلوكورونيداز در بذر گياهان تراريخت تائيد شد.نتيجه‌گيري: نتايج مناسب بودن سازه ژني طراحي شده را نشان داد، چرا كه پيشبرنده Napin به خوبي موجب بيان اختصاصي ژن GUS در بذر شده و توالي امگا نيز در افزايش بيان تراژن موثر بوده است. در ادامه كار مي‌توان اين سازه را با جايگزيني ژن‌هاي ارزشمند با ژن  GUSبراي توليد پروتئينهاي نوتركيب استفاده نمود.