استفاده از روش 16S Single Specific Primer PCR (16S SSP- PCR) به منظور شناسايي و جداسازي اختصاصي جنس شيگلا

در اين مطالعه با استفاده از ژنRNA ريبوزومي و بكارگيري روش Single Specific Primer PCR(SSP-PCR)، جنس شيگلا مورد شناسايي اختصاصي قرار گرفت. RNA هاي ريبوزومي كه داراي پايداري بسيار بالا و تعداد كپي هاي فراوان در سلول هستند، يكي از ابزارهاي مهم شناسايي اختصاصي سلول ها ميباشند و ژن 16S rRNA به عنوان بيوماركري استاندارد براي طبقه بندي و شناسايي سلول هاي پروكاريوتي مورد استفاده قرار ميگيرد. باتوجه به درصد بالاي هموژنيسيته در اين ژن و منطقه ي هتروژن اختصاصي كوتاه، در اين مطالعه از روش SSP-PCR به منظور شناسايي و جداسازي ژن 16S rRNA استفاده شد. اين روش با طراحي تنها يك پرايمر اختصاصي، تكثير ژن انجام ميشود. در اين مطالعه، ژن 16S rRNA گونه هاي مختلف باكتري شيگلا با ژن مذكور در ۵۷ باكتري مرتبط ديگر، مورد الايمنت قرار گرفت و تك پرايمر اختصاصي در ناحيه ي متغيير V6 طراحي شد. امپليكون به روش الكتروفورز دوبعدي بر روي ژل آگارز مورد بررسي قرار گرفت و تشكيل باند 253 bp به عنوان پاسخ مثبت در نمونه ها در نظر گرفته شد. مشخص گرديد كه در هر چهار گونه ي جنس شيگلا (شيگلا فلكسنري، شيگلا ديسانتري، شيگلابوييدي و شيگلا سونئي)، شناسايي به طور اختصاصي صورت گرفته و ساير گونه ها باند مرتبط را ايجاد نكردند. استفاده ژن 16S rRNA در كنار روش SSP-PCR ، يك تركيب بسيار كاربردي در شناسايي اختصاصي باكتري ها در كوتاه ترين زمان با سهولت بالا ميباشد. از كاربردهاي اين روش شناسايي ميتوان به تشخيص زودهنگام عفونت هاي باكتريايي به ويژه در شرايط اضطرار اشاره كرد.