قابليت تكثير يك وكتور VIGS بر پايه ALSV در توت‌فرنگي وحشي و شنبليله

هدف: امروزه، از ويروس ها، به علت توانايي طبيعي ويروس ها در انتقال ژن و الحاق به ژنوم ميزبان، به عنوان ابزاري قوي براي خاموشي ژن‌هاي دروني گياه و انتقال ژن بيگانه به درون سلول‌هاي ميزبان استفاده مي‌شود. سيستم خاموشي ژن القاءشده توسط ويروس (VIGS) در ژنتيك گياهي به دليل سهولت در استفاده و صرف زمان كوتاه براي ايجاد فنوتيپ موردنظر، كاربرد زيادي دارد. در اين راستا، وكتور ويروسي كروي پنهان سيب (ALSV) مي‌تواند براي VIGS پايدار و مؤثر در ميان طيف گسترده‌اي از گياهان ازجمله آرابيدوپسيس، درختان ميوه رزاسه، سولاناسه، فاباسه، كوكوربيتاسه، اسكروفولارياسه، و چند خانواده ديگر كاربرد داشته باشد. در اين تحقيق بهينه‌سازي تكثير و كاريرد گسترده‌تر وكتور VIGS بر پايه ALSV در گياهان باغباني و معرفي ميزباني جديد براي اين وكتور ويروسي مدنظر بوده است. مواد روش‌ها:براي اين منظور بذور توت‌فرنگي وحشي (Fragaria vesca) (توده Hawaii 4 (H4) (PI551572)) و شنبليله (Trigonella foenum graceum) كشت شده و گياهان حاصل براي مايه زني مورد هدف قرار گرفتند و از گياه كينوا (Chenopodium quinoa) به‌عنوان يك گياه واسطه براي تكثير ويروس استفاده شد. بدين منظور، پلاسميدهاي ويروسي pEALSR1 و pEALSR2 با دو روش كاربرد كاربوراندوم و تزريق با سرنگ به گياه كينوا انتقال يافتند. نتايج:گياهان كينوا بعد از 3 5 هفته، آلودگي به ويروس موردنظر را به‌صورت علائم نكروز و كلروز بروز دادند. سپس عصاره اين گياهان آلوده به ويروس استخراج شد و روي گياهان توت‌فرنگي و شنبليله مايه‌زني انجام شد. در هفته پنجم بعد از مايه‌زني، استخراج RNA كل از برگ‌هاي توت‌فرنگي و شنبليله و كينوا و درنهايت RT PCR انجام شد. نتايج نشان داد كه قطعه موردنظر متعلق به پلاسميد pEALSR2 به طول 211 جفت باز بوده و با استفاده از RT PCR انجام گرفته روي RNA استخراج شده از اين گياهان تكثير شده است.نتيجه‌گيري: اين موضوع نشان مي‌دهد كه اين وكتور ويروسي به سلولهاي گياهان مورد بررسي وارد شده و تا حدي كه با روشهاي مولكولي قابل تشخيص ياشد، تكثير شده است و بنابراين، مي‌توان از اين وكتور براي خاموشي ژن و بيش‌بيان ژنهاي كوچك در اين گياهان استفاده نمود.