جداسازي، شناسايي و اندازه‌گيري فعاليت آنزيم‌هاي فسفوليپاز A2 و هيالورونيداز زهر زنبور عسل ايراني mellifera meda) (Apis

هدف: زهر زنبور عسل حاوي آنزيم هايي مختلفي نظير هيالورونيداز و فسفوليپاز A2 است كه بعضي از آنها كاربرد دارويي و پزشكي دارند. در تحقيقات متعددي، فعاليت فسفوليپاز A2 و هيالورونيداز در گونه هاي مختلف زنبور عسل گزارش شده است اما گزارشي در مورد اين آنزيم‌ها و چگونگي فعاليت آنها در زهز زنبور عسل ايراني وجود ندارد. لذا هدف از اين تحقيق جداسازي، شناسايي آنزيم‌هاي فسفوليپاز A2 و هيالورونيداز و اندازه‌گيري ميزان فعاليت آنها در زهر خام و اجزاي زهر زنبور عسل ايراني (Apis mellifera meda) بود.  مواد و روش ها: ابتدا 100 ميلي‌گرم زهر خام زنبور عسل با كمك كروماتوگرافي سفادكس G-50 در بافر استات آمونيوم 05/0 ميلي مولار خالص‌سازي شد. جهت بررسي پروفايل پروتئيني زهر و  جزءبندي از روش الكتروفورز عمودي استفاده گرديد. سپس مقدار پروتئين، فعاليت آنزيم فسفوليپاز A2 و هيالورونيداز در زهر خام و فراكسيو ن‌هاي جدا شده اندازه‌گيري شد. مقدار پروتئين در زهر خام عسل ايراني و اجزاي آن با استفاده از پروتئين سنجي بروش برادفورد تعيين گرديد. ميزان فعاليت آنزيم فسفوليپاز A2  با استفاده از سوسپانسيون زرده تخم مرغ به عنوان سوبسترا تعيين شد و ميزان فعاليت هيالورونيداز روي هيالورونيك اسيد به روش توربيدومتري آزمايش شد. نتايج: نتايج اوليه نشان داد كه 56 درصد زهر خام پروتئين بوده است. زهر خام به 3 پيك (جزء) مجزا شد. فعاليت فسفوليپاز A2 در زهر خام و پيك اول و دوم مشاهد شد. فراكسيون دوم بيشترين فعاليت فسفوليپازي را نشان داد. فعاليت هيالورونيدازي در زهرخام و تنها در پيك اول مشاهده شد. فعاليت بهينه آنزيم فسفوليپاز A2 در pH برابر 7 و دماي 37درجه سانتيگراد بدست آمد. در اين مطالعه مشخص شد كه فعاليت هيالورونيداز در زهر زنبور عسل ايران بيشترين فعاليت را در دماي 37 تا 39 درجه دارد و با افزايش درجۀ حرارت به تدريج فعاليت خود را از دست مي‌دهد. همچنين نتايج اين مطالعه نشان داد كه pH ايده‌آل براي فعاليت آنزيم هيالورونيداز 5/5 مي‌باشد.نتيجه گيري: زهر زنبور عسل ايراني داراي هر دو فعاليت فسفوليپازي و هيالورونيدازي مي‌باشد كه با استفاده از كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون مي‌توان آنها را جدا كرد. اين بررسي مي‌تواند به عنوان روشي براي جداسازي، تخليص و اندازه‌گيري فعاليت آنزيم‌هاي هيالورونيداز و فسفوليپاز A2 زهر زنبور عسل ايراني معرفي شود. آنزيم‌هاي هيالورونيداز و فسفوليپاز A2 خالص‌ سازي شده مي‌توانند جهت استفاده در صنعت و تحقيقات مورد استفاده قرار گيرند.