توليد ايمونوگلوبولين زرده تخم‌ مرغ (IgY) عليه پروتئين نوتركيب TolC از باكتري شيگلا فلكسنري

زمينه: پيشرفت مقاومت آنتي‌بيوتيكي يك عامل نگران كننده جهاني براي مقابله با شيگلوزيس مي‌باشد. توسعه افلاكس پمپ‌ها از جمله پمپ AcrAB−TolC موجب گسترش مقاومت آنتي‌بيوتيك در سويه‌هاي شيگلا فلكسنري شده است. هدف از اين تحقيق توليد IgY عليه ايمونوژن نوتركيب TolC و ارزيابي ميزان اتصال آن به ايمونوژن نوتركيب بود. مواد و روش‌ها: پس از طراحي و سنتز سازه حاوي نواحي ايمونوژن پروتئين TolC، پلاسميد نوتركيب pET28a-tolC به سلول‌هاي مستعد (DE3)E. coli BL21  ترانسفورم شد. بيان پروتئين نوتركيب با غلظت 1 ميلي‌مولار IPTG القا گرديد. پروتئين نوتركيب به روش كروماتوگرافي ميل تركيبي با استفاده از رزين (Ni-NTA) Nickel-Nitrilotriacetic acid تخليص و با وسترن بلاتينگ ارزيابي شد. ايمن‌سازي مرغ‌هاي نژاد لگهورن با 200 ميكروگرم از پروتئين نوتركيب انجام شد. آنتي‌بادي مرغي به روش ترسيب با پلي اتيلن گليكول (PEG) استحصال و ارزيابي تيتر آنتي‌بادي در سرم و زرده تخم مرغ، در مرغ‌هاي ايمن شده در مقايسه با گروه كنترل به روش الايزا تعيين گرديد. يافته‌ها: پروتئين نوتركيب TolC با وزن مولكولي 40 كيلودالتون و بازده بياني ۱۰ ميلي‌گرم بر ليتر محيط كشت بيان شد. غلظت آنتي‌بادي مرغي تخليص شده 9 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر از زرده تخم مرغ بود. نتايج تيتر آنتي‌بادي در سرم عليه پروتئين نوتركيب پس از تزريق سوم تا رقت 1 به 6400 معني‌دار بود (0/05 P). در روش الايزا حداقل 7 نانوگرم از آنتي‌بادي به پروتئين نوتركيب واكنش نشان داد. نتيجه‌گيري: آنتي‌بادي‌هاي حاصل از ايمونوژن نوتركيب TolC مي‌توانند به عنوان منبع ايمني غيرفعال در بيماري ايجاد شده توسط شيگلا فلكسنري مورد بررسي قرار گيرند.