شناسايي گونه هاي انگل ليشمانياي جدا شده از بيماران مبتلا به كالاآزار به روش واكنش زنجيره‌اي پلي مراز يك مرحله اي

شناسايي گونه هاي انگل ليشمانياي جدا شده از بيماران مبتلا به كالاآزار به روش واكنش زنجيره‌اي پلي مراز يك مرحله اي

مقدمه: ليشمانيوز احشايي (كالاآزار) بيماري انگلي مهمي است كه توسط گونه‌هاي ليشمانياي دونواني و اينفانتوم ايجاد مي شود. شواهد اپيدميولوژي نشان مي دهد كه ليشمانيوز احشايي در بعضي از مناطق شهرستان جهرم از استان فارس شايع است. مطالعه حاضر با هدف تعيين هويت عامل ايجاد كننده ليشمانيوز احشايي در اين شهرستان انجام شد. روش كار: در اين مطالعه تجربي از 16 نفر بيمار مبتلا به كالاآزار بستري شده در بيمارستان شهيد مطهري جهرم در طي سال هاي 1377 تا 1383 نمونه مغز استخوان گرفته شد. دي ان آ از اسلايدهاي ميكروسكوپي تهيه شده از اين نمونه ها استخراج و گونه انگل با روش واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز (PCR) اختصاصي تعيين شد. براي اين كار با استفاده از پرايمر LINR4 و LIN17 قطعه متغير از حلقه هاي كوچك دي ان آي كينتوپلاستي انگل ليشمانيا تكثير و روي ژل آگاروز 5/1 درصد الكتروفورز شد. يافته ها: تمامي بيماران از نظر سرولوژي با استفاده از آزمون ايمونوفلوروسنت غيرمستقيم مثبت بودند. در بررسي اسميرهاي مستقيم مغز استخوان، آماستيگوت‌هاي انگل (اجسام ليشمن) به تعداد زياد مشاهده شد. تمامي نمونه ها در آزمايش واكنش زنجيره اي پلي مراز باندي به اندازه 720 جفت باز ايجاد كردند. مقايسه اين باندها با باندهاي گونه هاي استاندارد، مشخص نمود كه گونه انگل در تمامي بيماران ليشمانيا اينفانتوم است. بحث و نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه تعيين گونه با استفاده از روش واكنش زنجيره اي پلي مراز يك مرحله اي و پرايمرهاي LINR4 و LIN17 روشي ساده و سريع است. همچنين عامل ليشمانيوز احشايي در بيماران تحت بررسي ليشمانيا اينفانتوم مي باشد

Introduction: Visceral leishmaniasis (VL) or Kala-azar is an important parasitic diseases caused by protozoan parasites of the genus Leishmania including L. donovani, L. infantum. Epidemiological evidences show that VL is frequently common in some areas of Jahrom district in Fars Province. This study aimed to characterize the causative agent of VL in this region. Materials and Methods: Bone marrow sample was obtained from 16 VL patients from Pediatric hospital in Jahrom town. DNA was extracted from the microscopic slides and checked by specific PCR to find out the species of the parasite. To do it, a segment of minicirclekinetoplast DNA was amplified, using LINR4 and LIN17 primers. Products of PCR were evaluated by electrophoresis, using 1.5% agarose. Results: Anti-leishmania antibody was detected in all patients by IFAT. Examination of bone marrow smears demonstrated numerous amastigotes of Leishmania (Leishman bodies) in the samples. All the samples produced a 720 bp band in PCR assay. The isolates were compared with reference strains and revealed that all the isolates are L. infantum. Conclusion: Our findings showed that species characterization with one-step PCR by LIN17 and LINR4 is simple and fast; it was also confirmed that the causative agent of VL in Jahrom is L. infantum.