ساخت ناقل هاي نوتركيب حاوي ژن كدكننده پروتيين تنظيمي توليد آنتي بيوتيك استرپتومايسين، جدا شده از يك سويه استرپتومايسس گريزيوس ايراني

Construction of Streptomyces specific recombinant vectors containing the streptomycin regulatory gene isolated from an Iranian Streptomyces griseus

يك تنظيم‌كننده كليدي در رونويسي خوشه ژني بيوسنتز آنتي بيوتيك استرپتومايسين است. اين پروتيين توسط ژن strR استرپتومايسس گريزيوس با طول 1053 جفت باز كد مي شود. هدف اين تحقيق، كلونينگ ژن strR از سويه استرپتومايسس گريزيوس ايراني PTCC1127 و همچنين ATCC1952 درناقل pMA::hyg بود. براي اين منظور پرايمرهاي اختصاصي ژن strR با نرم افزار Oligo طراحي شدند، قطعه با طول 1134جفت باز به روش PCR تكثير شد. سپس با روش Semi nested PCR و PCR-RFLP محصول PCR تاييد و درناقل تداخلي pMA::hyg مخصوص استرپتومايسس الحاق گرديد. در واكنش الحاق، به دليل به كارگيري دو جايگاه برش متفاوت BamHIو XbaI در دو انتهاي ژن strR و استفاده از همين دو جايگاه برش درناقل pMA::hyg احتمال خودالحاقي (Self ligation) ناقل pMA::hyg وجود نداشت. در مرحله بعد، ناقل هاي نوتركيب ساخته شده به نام‌ pSPstrR (حاوي ژن strR مشتق از سويه PTCC1127) و pSMstrR (حاوي ژن strR مشتق از سويه ATCC1952) به سلول‌هاي مستعد باكتري E. coli XL1-Blue ترانسفورم شدند. ساختار سازه هاي جديد توسط روش هاي مختلف مولكولي تاييد گرديد. از طرف ديگر ژن strR جدا شده در وكتور مولتي كپي و بياني pBluescript نيز ساب كلون گرديد. در آينده مي‌توان از اين ناقل هاي نوتركيب ساخته شده به عنوان ابزارهاي مناسبي براي جهش زايي جهت دار شده در جايگاه (site directed mutagenesis) و استراتژي هاي جايگزيني ژن (gene replacement) در استرپتومايسس گريزيوس استفاده كرد. از طرف ديگر از پروتيين توليد شده در E. coli ميتوان جهت القا و افزايش توليد آنتي بيوتيك در محيط كشت استرپتومايسس استفاده نمود. علاوه بر اين مي توان ژن strR را با واسطه يك ناقل بياني مثل pMT3206 در ميزبان استرپتومايسس گريزيوس كلون و اثر افزايش بيان اين ژن تنظيمي را در افزايش ميزان توليد آنتي‌بيوتيك استرپتومايسين بررسي كرد.