تشخيص همزمان ژن cagA و آللهاي ژن vacA باكتري هليكوباكتر پيلوري در بيماران مبتلا به التهابات دستگاه گوارشي با روش Multiplex PCR

Simultaneous detection of caga gene and vaca alleles in Helicobacter pylori isolated from patients with gastrointestinal inflammations using multiplex PCR.

هليكوباكتر پيلوري باكتري گرم منفي ميكروآيروفيليكي‌است كه در سراسر جهان جمعيت زيادي از انسانها را آلوده مي‌كند. آلودگي با اين باكتري گرچه در اكثر موارد بدون علايم باليني است ولي در برخي از افراد مي‌تواند همراه با علايم باليني و در مواردي منجر به بروز بدخيميهايي مانند آدنوكارسينوما و لنفوماي معده گردد. فاكتورهاي ويرولانس متعددي از اين باكتري مورد بررسي قرار گرفته‌اند كه از آن جمله مي توان به ژنهاي cagA و vacA اشاره نمود. هدف از اين مطالعه، علاوه بر پايه‌ريزي تست Multiplex PCR جهت تشخيص سريع و همزمان اين‌دو ژن در يك نمونه، بررسي ارتباط حضور اين فاكتور‌هاي ويرولانس با شدت بروز التهابات دستگاه گوارش انسان مي‌باشد. اين مطالعه برروي 66 بيمار مبتلا به التهابات دستگاه گوارشي كه تست سريع اوره‌آز مثبت داشتند، انجام گرديد. از اين تعداد 21 مورد رشد هليكوباكتر پيلوري از نمونه بيوپسي معده بر روي محيط‌ كشت مشاهده گرديد. شناسايي كلنيهاي باكتري با تستهاي بيوشيميايي تاييد شد. با انجام Multiplex PCR برروي DNA باكتري جدا شده در 15 مورد ژن cagA ، 9 مورد ژنوتيپ s1m1 ، 12 مورد s1m2 و 5 مورد s2m2 برروي ژل شناسايي گرديد. ضمن اينكه ژنوتيپ s2m1 در اين مطالعه مشاهده نشد. بيشترين فراواني آللي مربوط به آللهاي s1 و m2 بود. بيشتر بيماران مورد مطالعه التهاب منتشره ناحيه آنتروم معده داشتند و در اكثر موارد حضور ژن cagA با ژنوتيپ s1m2 بود. اين تحقيق نشان دهندهي آن است كه احتمالاً بين حضور همزمان اين‌دو و شدت بروز التهابات دستگاه گوارشي رابطه‌اي وجود دارد.

Helicobacter pylori is a gram negative and microaerophilic bacterium which infects a lot of people all over the world. Although in most cases the infected individuals usually show no symptoms of infection, but seldom its infection leads to gastrointestinal inflammation, peptic ulcer and even malignancies such as gastric adenocarcinoma and lymphoma. Several virulence factors of this bacterium including cagA and vacA adequately have been investigated by numerous researchers in this field. The aim of this study was to establish the multiplex PCR test for a simultaneous and rapid detection of the above mentioned genes as well as determining any relationship between the virulence factors and the severity of the gastrointestinal inflammations. In this study, gastric biopsies of 66 patients with positive rapid urease test were collected for further studies. From these samples, only 21 could grow on standard culture media. All the bacterial isolates were confirmed by biochemical tests. Chromosomal DNA was extracted from bacterial isolates and further examined by multiplex PCR. In 15 cases cagA, 9 cases s1m1, 12 cases s1m2 and 5 cases s2m2 were seen. No s2m1 genotype was found. The most frequent allelic forms were related to s1 and m2 alleles. Most of the patients in this study had diffuse antral gastritis. In most cases cagA and s1m2 were accompanied together. These data indicate that probably there is a relationship between simultaneous presence of these factors and the severity of the gastrointestinal inflammations.