جداسازي و شناسايي آركي‌هاي نمك‌دوست اجباري قابل كشت تالاب پُر شور اينچه‌برون، استان گلستان

Isolation and identification of culturable extremely halophilic archaea of Inche-Boroun wetland

تنوع آركي‌هاي نمك‌دوست تالاب اينچه‌برون واقع در استان گلستان ايران با روش‌هاي مبتني بر كشت بررسي شد. نمونه‌برداري در دو فصل پُر بارش و كم بارش (ارديبهشت‌ و شهريورماه 1389) انجام گرفت. در هر نمونه‌برداري چهار منطقه مشخص از تالاب با استفاده از محيط‌هاي پيچيده نظير MGM، JCM168، MH1 و يك محيط قليايي حاوي 23 درصد نمك بررسي شد. پس از گرماگذاري (incubation) در دماي 40 درجه سانتيگراد، 406 جدايه به دست آمد. متوسط تعداد كلوني‌هاي به دست آمده در روش كشت، CFU/ml 106×1/2 بود. 361 جدايه از محيط MGM، 39 جدايه از محيط JCM168، سه جدايه از محيط MH1 و سه جدايه از محيط قليايي به دست آمد. تعدادي از ويژگي‌هاي ريخت‌شناسي، بيوشميايي و فيزيولوژيكي اوليه براي اين سويه‌ها بررسي شد و از ميان اين جدايه‌ها، 45 سويه بر اساس صفات بررسي شده انتخاب و با تكثير و تعيين ترادف ژن 16S rRNA شناسايي شدند. از اين تعداد 40 سويه به خانواده Halobacteriaceae جنس‌هاي Haloarcula، Halorubrum، Haloferax، Halobellus، Halogeometricum، Halobacterium، Halolamina، Halorhabdus و Halostagnicola (به ترتيب: 30، 5/27، 5/17، 10، 2/5، 6/2، 6/2، 6/2 و 6/2 جدايه‌هاي مربوط به قلمرو آركي‌ها) تعلق داشتند و پنج سويه به سلسله باكتري‌ها، جنس‌هاي Rhodovibrio، Pseudomonas و Salicola (به ترتيب 40، 40 و 20 درصد سويه‌هاي باكتريايي) متعلق بودند. با توجه به تعداد محدود جنس‌هاي آركي نمك‌دوست شناسايي شده در جهان، بررسي‌ها بيانگر تنوع نسبتاً بالاي آركي‌هاي نمك‌دوست قابل كشت در اين تالاب است.

Haloarchaeal diversity of Inche-Boroun wetland in north of Iran in Golestan province was investigated by using culture-dependent methods. Sampling was carried out in May and September 2010. In each sampling, 4 distinct region of wetland were analyzed by using complex media like MGM, JCM168, MH1 and an alkaliphilic medium containing 23% salts. After incubation at 40?C, a total of 406 isolates were prepared and 2.1×106 CFU/ml were obtained in culture media. Among all isolates, 361 isolates were obtained from MGM and 39 isolates from JCM 168, 3 isolates from MH1 and 3 isolate from alkaliphilic media. Initial morphological, biochemical and physiological tests were performed. According to the results, 45 isolates were selected and phylogenetic analysis of 16S rRNA was performed for them. Among selected strains, 40 isolates belonged to Halobacteriacaea and were related to Haloarcula, Halorubrum, Haloferax, Halobellus, Halogeometricum, Halobacterium, Halolamina, Halorhabdus and Halostagnicola (respectively 30, 27.5, 17.5, 10, 5.2, 2.6, 2.6, 2.6 and 2.6 percent of Haloarchaeal strains). A total of 5 strains belonged to the kingdom of Bacteria and were related to Rhodovibrio, Pseudomonas and Salicola (respectively 40, 40 and 20 percent of bacterial strains). According to our results and the limited numbers of haloarchaeal genera that having been discovered until now, it seemed that the culturable prokaryotic populations in this hypersaline environment was diverse.