خالص‌سازي ايزومرهاي اسيد لينولييك مزدوج از طريق استريفيكاسيون انتخابي با ليپاز كانديدا رگوزا

Purification of conjugated linoleic acid isomers by selective esterification with Candida rugosa lipase

توانايي آنزيم كانديدا رگوزا براي جداسازي دو ايزومر اصلي اسيد لينولييك مزدوج (CLA) شامل ايزومر 9- سيس، 11- ترانس و 10- ترانس، 12- سيس در مخلوطي از اسيدهاي چرب آزاد اين دو ايزومر و ال- منتول مورد بررسي قرار گرفت و به منظور جداسازي اين دو ايزومر به طور موثر، بهينه‌سازي شرايط واكنش با استفاده از طرح سطح پاسخ انجام شد. پس از آناليز داده‌ها با استفاده از طرح دي- اپتيمال، بهترين شرايط براي حداكثر استريفيكاسيون ايزومر 9- سيس،11- ترانس با ال- منتول طي يك مرحله استريفيكاسيون به اين ترتيب تعيين شدند: مدت زمان واكنش 12/23 ساعت، دماي واكنش 65/32 درجه سانتيگراد، مقدار آنزيمU40/135، نسبت مولي CLA به ال-منتول 1 به 7/1 و pH 7/7. تحت اين شرايط بهينه، كمترين مقدار باقيمانده از ايزومر 9- سيس،11- ترانس در بخش اسيد چرب آزاد واكنش (7/6%) پس از استريفيكاسيون مشاهده شد. اين فرايند كارامد براي جداسازي ايزومرهاي CLA با استفاده از ال- منتول، قابل اجرا براي تهيه مكمل‌هاي غذايي است.

Ability of Candida rugosa for separation of two main conjugated linoleic acid (CLA) isomers including 9-cis,11-trans and 10-trans,12-cis was investigated in the mixture of free fatty acids of these isomers and L-menthol. In order to effectively separate two mentioned isomers, optimization of reaction conditions was conducted using response surface methodology (RSM). After data analysis by D-optimal design, the best reaction conditions for maximum esterification of 9-cis,11-trans isomer with L-menthol after just one step esterification were as follows: reaction time 23.1 h, temperature 32.6°C, enzyme amount 135.4U, molar ratio of CLA oil to L-menthol at 1:1.7 and pH at 7.7. At this optimum point, the lowest amount of c9, t11-CLA isomer (6.7%) was observed in free fatty acids fraction. This effective process for purification of CLA isomers using L-menthol could be applicable to produce food supplements.