طراحي و ساخت سازه اختصاصي كلرو پلاستي گياه برنج حاوي ژن هاي بتائين آلدهيد دهيدروژناز(badh) و فلاودكسين(fld) جهت ايجاد مقاومت به تنش هاي غير زنده

تنش­هاي غير­زيستي از جمله خشكي و شوري اولين عامل كاهش محصول در دنيا است. در اين تحقيق ژن بتائين آلدهيد دهيدروژناز (badh) هم به عنوان يك نشانگر غير­آنتي­بيوتيكي و هم به عنوان يكي از ژن­هاي كانديد در تحمل به تنش­هاي غير­زيستي به همراه ژن فلاودكسين (fld) در ساخت ناقل كلروپلاستي براي گياه برنج مورد استفاده قرار گرفت. بدين منظور ابتدا دو قسمت از يك ناحيه اختصاصي هدف­گيري كننده به پلاستوم برنج (FR) با افزودن جايگاه آنزيمي مناسب جهت ورود كاست­هاي ژني به مركز آن، در دو مرحله به گونه­اي با استفاده از PCR از ژنوم كلروپلاستي برنج جدا­سازي شد كه امكان اتصال مجدد آنها ضمن كلون­سازي ايجاد گردد. سپس طراحي كاست ژني براي ژن هاي fld و badh تحت نواحي تنظيمي كلروپلاستي انجام شد، به طوري­كه ژن fld همراه با rbcl 5ʹʹUTR و ژن badh همراه با T7gene10 5ʹʹUTR به صورت پلي­سيستروني تحت پيشبر قوي كلروپلاستي Prrn و پايانبر rbcl 3ʹʹUTR كلون­سازي شدند. سرانجام كاست كامل دو ژني fld/badh به همراه نواحي تنظيمي از ناقل نوتركيب حاصل موسوم به pBF جدا و در مركز ناحيه هدف گيري كننده به كلروپلاست برنج در دو جهت كلون­سازي گرديد. دو ناقل مختص كلروپلاست حاصل موسوم به pFrFB(-) و pFrFB(+) پتانسيل الحاق هدفدار ژن­هاي مقاومت به شوري و خشكي را با دو جهت­گيري مختلف نسبت به نواحي داخلي ژنوم كلروپلاستي گياه برنج دارا بوده و قادرند با هدف ايجاد مقاومت بالا به شوري، خشكي و سرما در انتقال ژن به كلروپلاست گياه برنج با استفاده از تفنگ ژني مورد استفاده قرار گيرند.