سنتز و همسانه‌سازي ژن كدكنندۀ پروتئين شيرين‌ برازئين

امروزه مشكلاتي كه جذب ساكارز براي سلامتي افراد به‏‏وجودآورده، تقاضا براي شيرين‌كننده‏هاي طبيعي داراي مزۀ مطلوب‏تر و جذب كمتر ازجمله پروتئين‌هاي شيرين را افزايش داده است. در ميان آنها برازئين به واسطۀ شيريني قوي، منشاء طبيعي و پايداري مطلوب جايگزيني مناسب براي ساكارز محسوب مي‏شود. برازئين از ميوة گياه آفريقايي Pentadiplandra brazzeana Baillon كه توليد تجاري آن در مقياس بالا غيرعملي است، جدا شده است. بنابراين توليد تجاري وسيع اين پروتئين نيازمند بيان آن در يك سيستم هترولوگوس ازطريق تكنولوژي DNA نوتركيب است. در اين پژوهش باتوجه‏به در دسترس نبودن ژنوم گياه P. brazzeana سنتز مصنوعي ژن برازئين با استفاده از تكنيك‏هاي Assembly PCR و SOEing PCR انجام شد. ابتدا توالي اسيدآمينه‌اي پروتئين برازئين با سرور Emboss Backtranseq براساس كدون‌هاي ترجيحي ذرت به توالي 162 نوكلئوتيدي ترجمه شد. سپس با استفاده از 6 آغازگر هم‏پوشان طي 5 واكنش متوالي PCR توالي كامل ژن برازئين سنتز شد. نتايج حاصل از واكنش PCR صحت كار را نشان داد. سپس قطعۀ حاصله در وكتورهاي بياني گياهي pBI121 با پيشبر عمومي CaMV35S و پيشبر اختصاصي بذر Napin كلون شد و نتايج تعيين توالي صحت قطعۀ سنتزي كلون‏شده را تأييد كرد.