بررسي واژگوني اينترون 22 و ماركر HindIII در اينترون 19 ژن فاكتور VIII انعقادي در بيماران هموفيل A

The study of intron 22 inversion and Hin dIII marker in inron 19 of FVIII gene in severe hemophilia A

هموفيلي A يك بيماري وابسته به X مغلوب است كه به دليل نقص در فاكتور انعقادي VIII ايجاد مي شود. واژگوني اينترون 22 توسط روش هاي سادرن بلات و Long Distance-PCR و اخيراً توسط Inverse Shifting-PCR شناسايي شده است. هدف از انجام اين مطالعه، بررسي روش جديد IS-PCR به منظور شناسايي جهش شايع Inversion-22 و بررسي ميزان همراهي پلي مورفيسم C/T در اينترون 19 در بيماران هموفيل شديد و افراد كنترل براي شناخت هاپلوتايپ ها مي باشد. به اين منظور 40 مرد هموفيل شديد غير خويشاوند و 40 فرد سالم براي اين آزمايش انتخاب شدند. نتايج آزمايش IS-PCR نشان داد كه 17 نفر از 40 بيمار هموفيل شديد (0/42 درصد) داراي واژگوني در اينترون 22 هستند. نتايج به دست آمده از همراهي پلي مورفيسم C/T نشان داد كه هيچ گونه همراهي براي پلي مورفيسم C/T بين جمعيت بيمار و كنترل وجود ندارد. اينكه اين نتايج مي تواند به عنوان روش هاي تشخيصي استفاده شود يا نه، نياز به بررسي بيش تر و توالي يابي قطعه تكثير شده موتانت، تنظيم شرايط PCR و يا طراحي آغازگر هاي جديد دارد. IS-PCR روشي قدرتمند و كم هزينه است كه مدت زمان آزمايش را كاهش مي دهد و مي تواند جايگزين خوبي براي روش هاي قبلي باشد.

Hemophilia A is an X-linked, recessive disorder caused by deficiency of functional plasma clotting factor VIII (FVIII). Inversion of intron 22 is recognized by methods like Long Distance-PCR southern blot and recently by Inverse Shifting-PCR. The aim of this research is to evaluate the efficiency of a new method, IS-PCR, in order to recognize the common Inversion-22 mutation, and to evaluate the association of C/T polymorphism in intron 19 among sever hemophilia A patients and control people which were studied to identify the haplotypes. For this purpose, 40 unrelated sevre hemophilia male patients and 40 healthy male controls were selected. IS-PCR results showed that 17 of 40 severe hemophilia cases (0.42) had inversion of intron 22. The results from the association of the polymorphism C/T showed that there is no association for polymorphism C/T between patient and control subjects.Whether these results can be used as a diagnostic method or not, requires further investigations on the amplified mutant fragment sequencing, PCR adjustment or designing new primers. Since IS-PCR method of inversion assessing is powerful and not time-consuming method could be used as an alternative to old methods.