بيان ژن blf1، Burkholderia pseudomallei در باكتري اشرشياكلي و بررسي تيترآنتي‌بادي در موش

Expression of blf1 Gene of Burkholderia pseudomallei in Escherichia coli and Assessment of Antibody Titer in Mouse

چكیده زمینه و هدف: باكتریB. pseudomallei  عامل بیماری میلوئیدوزیس در انسان است و از راه خوراكی، استنشاقی و یا از طریق خراش پوستی به بدن بیماران منتقل می‌شود. این عامل در طبقه‌بندی عوامل بیولوژیك در گروه  B قرار گرفته است.  BLF1 به‌طور اختصاصی دآمیناسیون Gln339 از eIF4A را انجام می‌دهد. در این مطالعه، بیان ژن blf1 باكتری B. pseudomallei در E. coli  و تولید آنتی‌بادی در موش بررسی گردید. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، بیان ژن blf1 باكتری B. pseudomallei در E. coli صورت گرفت. ژن صناعی در پلاسمید pUC57 از شركت ندای فن خریداری شد. پلاسمید pUC57 حاوی ژن blf1 با جایگاه‌های آنزیمی BamHI و SalI در وكتور بیانی pET28a(+) زیرهمسانه‌سازی شد و به باكتری E. coli سویه BL21(DE3)، تراریخت (ترانسفورم) گردید. بیان ژن blf1 تحت القایIPTG  انجام گرفت. یافته‌ها: در این مطالعه، ژن blf1 كلون‌شده در وكتور بیانی pET28a(+) به‌وسیله PCR و آنالیز آنزیمی تأیید شد. همچنین پروتئین نوتركیب تولیدشده به‌وسیله SDS-PAGE و لكه‌گذاری وسترن تأیید گردید. سپس آنتی‌بادی تولیدشده از سرم موش، جداسازی و به‌وسیله تست ELISA مورد تأیید قرار گرفت. نتیجه‌گیری: با توجه به اینكه پروتئینBLF1 توانایی توقف پروتئین‌سازی را دارد و آنتی‌بادی تولیدشده به‌وسیله تست ELISA مورد تأیید قرار گرفته است، از پروتئین نوتركیب BLF1 ‌می‌توان برای درمان سرطان استفاده و به‌عنوان كاندیدای واكسن، علیه باكتری B. pseudomallei مطرح نمود.  

Background and Objectives: Burkholderia pseudomallei is the cause of the melioidosis disease in human, and is transmitted to patients through oral route, inhalation, or skin scratch. This agent is classified as a category B in the classification of biological agents. BLF1 specifically deaminates Gln339 from eIF4A. In this study, the expression of blf1 gene of B. pseudomallei in E. coli and antibody production in mouse, were assessed.   Methods: In this experimental study, blf1 gene of B. pseudomallei, was expressed in E. coli. The synthetic gene in pUC57 plasmid was purchased from Nedaye Fan COR. pUC57 plasmid containing blf1 gene with BamHI and SalI restriction enzyme sites, was subcloned in pET28a(+) expression vector and transformed into E. coli BL21(DE3). blf1 gene expression was induced by IPTG.   Results: In this study, blf1 gene in cloned pET28a(+) expression vector, was approved by PCR and enzymatic analysis. Also, the produced recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Then, antibody produced from the mice serum, was isolated and confirmed by ELISA test.   Conclusion: Given that BLF1 protein has the ability to stop protein synthesis and the produced antibody was confirmed by ELISA, the BLF1 recombinant protein can be used to treat cancer and as a vaccine candidate against B. pseudomallei.