Susceptibility of various cell lines to Neospora caninum tachyzoites cultivation

نيوسپورا كنينوم (Neospora caninum) يك تك ياخته داخل سلولي اجباري و عامل بيماريزاي مهم در گاو و سگ بشمار مي رود. امروزه به طور گسترده اي از كشت سلولي به منظور جداسازي و تكثير نيوسپورا كنينوم براي اهداف مختلفي استفاده مي شود. در اكثر مطالعات، سلول Vero (با منشا سلول هاي كليه ميمون سبز آفريقايي) به عنوان بهترين سلول براي جداسازي و تكثير نيوسپورا معرفي شده است. در اين مطالعه حساسيت سلول هاي مختلف به اين انگل و توان تكثير آن در رده هاي مختلف سلولي مورد ارزيابي قرار گرفته است. بدين منظور در ابتدا تاكي زوييت هاي انگل به منظور آداپته سازي به رده هاي سلولي SW742,Vero ,TLI ,MA-104, MDCk ,McCoy افزوده شد و به مدت دو هفته كشت داده شد. سپس ميزان يكساني از تاكي زوييت در مجاورت ميزان يكساني از هر كدام از رده هاي سلولي نامبرده قرار گرفت و تا زمان ايجاد CPE كامل در همه سلول ها، روزانه (به مدت 5 روز) 10 فيلد از فلاسك كشت سلولي در زير ميكروسكوپ اينورت مشاهده و تاكي زوييت هاي رها شده در آن، شمارش شدند. در روز چهارم بيشترين ميزان تاكي زوييت هاي رها شده از سلول ها مشاهده شد و در روز پنج رو به كاهش رفت. ميانگين تاكي زوييت هاي رها شده از سلول ها در روز چهارم بعد از انكوباسيون، حساسيت خوبي را در سلول (24.2×104)Vero، (22.1×104)MA-104، (21.2×104) SW742 و (20.58×104) TLI نشان مي دهد. در حاليكه سلول هاي (MDCK 8125) و (McCoy 9375) حساسيت و توان تكثير كمي براي نيوسپورا از خود نشان دادند. با توجه با اين نتايج سلول MA-104 و TLI و SW742 سلول هاي مناسبي جهت جداسازي و تكثير نيوسپورا مي باشد. در ضمن با توجه به اين كه سلول TLI (لنفوسيت ترانسفورم شده با تيلريا) يك سلول معلق مي باشد كار كردن با اين سلول به مراتب راحت تر، سريعتر و كم هزينه تر از سلول هاي چسبنده مي باشد.

Neospora caninum is a coccidian protozoan parasite which is a major cause of bovine abortions and neonatal mortality in cattle, sheep, goat and horse. Occasionally, cultured cells are used for isolation and multiplication of the agent in vitro with several purposes. In this study the tachyzoite yields of N. caninum were compared in various cell cultures as the host cell lines. Among the cell cultures tested, two presented good susceptibility to the agent: cell lines Vero and MA-104. SW742 and TLI (in vitro suspension culture of lymphoid cells infected with Theileria lestoquardi) showed moderate sensitivity. No viable tachyzoite were detected in the culture of MDCK and McCoy cell lines. These results demonstrate that MA-104 and SW742 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to Vero cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Moreover, these have easy manipulation, fast multiplication and relatively low nutritional requirements. In addition, the result of this study showed that TLI cell line as a suspension cell culture is susceptible to Nc-1 tachyzoites infection and could be used as an alternative host cell line for tachyzoites culture in vitro studies.