Development of a recombinant protein-based dot-blot hybridization assay for the detection of antibody to chicken infectious bronchitis virus

در اين مطالعه آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي بر اساس پروتئين نوترکيب نوکلئوکپسيد ويروس برونشيت عفوني براي تشخيص سرولوژيک برونشيت عفوني طيور بهينه سازي گرديد. در ابتدا 72 نمونه سرمي به وسيله آزمايش اليزا مورد بررسي قرار گرفتند. 46 نمونه سرمي تشکيل دهنده گروه A که در آزمايش اليزا جذب نور (OD) بالاي نقطه برش داشتند تماماً در آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي سيگنال‌هاي قوي ايجاد کردند. گروه B شامل 7 نمونه سرمي که در آزمايش اليزا مقادير جذب نور (OD) پايين‌تر از نقطه برش ولي بالاتر از نمونه کنترل منفي داشتند در آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي سيگنال‌هاي ضعيف ايجاد کردند. با استفاده از آزمايش لکه‌گذاري وسترن نشان داده شد که سيگنال‌هاي ايجاد شده در آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي اختصاصي بودند. بقيه 19 نمونه (گروه C) که از جوجه‌هاي عاري از عوامل بيماريزاي خاص (SPF) جمع‌آوري شده بودند در آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي هيچگونه سيگنال قابل رويت ايجاد نکردند. نتايج آزمايش‌هاي فوق نشان مي‌دهد که آزمايش لکه‌گذاري نقطه‌اي بهينه شده در اين مطالعه يک آزمايش قابل انجام، حساس و اختصاصي است و مي‌تواند به عنوان يک جايگزين مناسب براي آزمايش اليزا جهت تشخيص سرولوژيک برونشيت عفوني طيور و پاسخ به واكسن برونشيت عفوني طيور مورد استفاده قرار بگيرد.

Nucleocapsid (N) protein of infectious bronchitis virus (IBV), one of the viral structural proteins, induces strong antibody response in natural infection. In this study, a simple, recombinant N protein-based dot-blot test was developed to serologically examine chicken serum samples for the presence of IBV antibody. Initially, 72 serum samples were tested for the presence of IBV antibody using a commercial enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit. Forty six IBV positive serum samples (group A) produced strong signals in the dot-blot assay. Seven negative serum samples (group B) produced weak but specific signals using the dot-blot assay in conjunction with Western blot analysis. The remaining 19 samples (group C) from IBV negative specific pathogen free (SPF) chickens did not produce visible signals using the dot-blot assay. In conclusion, the above results suggest that the dot-blot assay is a reliable, sensitive, and specific test for serological detection of IBV positive chickens.