Author/Authors :
كاي، ميهونگ نويسنده State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210093, PR, China Cai, M , ژو، فنگ نويسنده State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210093, PR, China Zhu, F , وو، هااُچن نويسنده State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210093, PR, China Wu, H , شن، پينگ پينگ نويسنده State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu 210093, PR, China Shen, P
Abstract :
بيماري بورس عفوني (IBD) يك بيماري نابود كننده و به شدت واگير در ماكيان جوان مي‌باشد و عامل ايجاد كننده آن ويروس بيماري بورس عفوني مي‌باشد (IBDV). به منظور بهينه كردن ايمني‌زايي واكسن تحت واحدي نو تركيب IBDV، از واكسن IBD حاوي آنتي‌ژن mVP2 گليكوزيله شده استفاده گرديد. در ابتدا ژن mVP2 ويروس IBDV همراه با يك توالي اسيد نوكلئيك كد گذاري شده اپي‌توپ سلولي B ويروس IBDV (KFDQML) در انتهاي 5´ ژن VP2، همراه با يك توالي اسيد نوكلئيك كد گذاري شده اپي‌توپ سلولي B ويروس IBDV (LASP) و برچسب هيستيديني (His) در انتهاي 3´ ژن VP2 كلون گرديد. سپس پروتئين mVP2 ويروس IBDV در مخمر متيلوتروف Pichia pastoris كه مي‌تواند پروتئين گليكوزيله را ترشح كند، بيان گرديد. پروتئين نو تركيب mVP2 با رنگ‌آميزي PAS به رنگ صورتي در مي‌آيد كه بيانگر گليكوزيله شدن آن مي‌باشد. در انتها پروتئين mVP2 ويروس IBDV با استفاده از ستون هيستيديني كروماتوگرافي خالص گرديد. نتايج نشان داد كه پروتئين گليكوزيله ويروس IBDV تغيير يافته با پپتيدهاي اپي‌توپ مي‌تواند در مخمر Pichia pastoris بيان گردد. اين تحقيق زمينه‌اي براي توسعه و تكامل يك واكسن نو تركيب بيماري بورس عفوني با ايمني‌زايي بالا را فراهم مي‌كند.
Abstract :
Infectious bursal disease (IBD), a highly contagious and devastating disease in young chicken, is caused by infectious bursal disease virus (IBDV). To improve the immunogenicity of recombinant IBDV subunit vaccine, an attempt was made to find a new way to prepare IBD vaccine containing glycosylated mVP2 antigen. Firstly, IBDV mVP2 gene (with a nucleic acid sequence encoding B cell epitope of IBDV (KFDQML) in the 5′-end of the VP2, with a nucleic acid sequence encoding B cell epitope of IBDV (LASP) and (His) 6-tag in the 3′-end of the VP2) was cloned. Secondly, IBDV mVP2 protein was expressed in the methylotrophic yeast Pichia pastoris which can secret glycosylated protein. The recombinant mVP2 protein could be stained pink with periodic acid-schiff reagents (PAS), which showed that mVP2 was glycosylated. Finally, IBDV mVP2 protein was purified with His-Trap (1 mL) affinity chromatography. These results indicate that glycosylated IBDV VP2 protein modified with epitope peptides can be expressed in Pichia pastoris, which lay the groundwork for the development of a recombinant infectious bursal disease vaccine with high immunogenicity.
