Crude extract of bacterially expressed, infectious bursal disease virus VPX/VP2 proteins induces protective immune response to the virus in chickens

ويروس بيماري بورس عفوني طيور( گامبورو) عامل عفونت در جوجه هاي جوان باعث خسارات جدي به صنعت طيور در سراسر جهان مي باشد. تا بحال تلاشهاي زيادي جهت پيشگيري از اين بيماري شده است و اخيرا نيز با استفاده از بيان ژن VP2 در باكتري و تخليص آن در برانگيختن سيستم ايمني بدن طيور تحقيقاتي صورت گرفته است كه عمدتا با نتايج مطلوبي همراه نبوده است در اين مطالعه ميزان برانگيختن سيستم ايمني جوجه ناشي از بيان اپي تپ هاي خنثي كننده ويروس موجود در ژن VP2 و پيش ساز آن VPXاز ويروس بسيار حاد و شايع در ايران (SDH1) در باكتري BL21 مورد بررسي قرار گرفته است. در اين تحقيق به ميزان cc 3/0 از سوسپانسيون حاوي پيكره باكتري و پروتيين نو تركيب بصورت جداگانه و يا همراه با اجوانت به جوجه هاي SPF در سنين 0، 2، 4 هفتگي بصورت زير پوستي تزريق شد. تيتر آنتي بادي 2 هفته پس از واكسيناسيون قابل اندازه گيري بود و بيشترين تيتر 4 هفته پس از واكسيناسيون ثبت شد. در آزمايش مواجهه با ويروس نيز گروه در يافت كننده سوسپانسيون همراه با اجوانت بدون علايم كلينكال زنده ماندند ( با 100% مصونيت) در حاليكه تمامي جوجه هاي گروه شاهد 3-4 روز پس از مواجهه با ويروس تلف شدند. نتايج فوق نشان مي دهد بيان پروتيين VP2حاوي اپي تپ هاي خنثي كننده در باكتري در صورتيكه در پروسه تخليص دچار تغييرات ساختاري نشود مي تواند بعنوان جايگزين واكسن پيشنهاد شود.

Infectious bursal disease virus (IBDV) infects young chickens and causes serious lose to the poultry industry, worldwide. Previous attempts using purified bacterially expressed IBDV VP2 failed to elicit a protective immune response to the virus. This study was designed to investigate if the initial expressed protein contained neutralizing epitopes but became nonfunctional during purification steps. The full length IBDV VP2 and its precursor VPX genes from the highly virulent IBDV (hvIBDV) SDH1 isolate were cloned and expressed in BL21 bacterial cells. Specific pathogen-free (SPF) chickens were inoculated subcutaneously with 0.3 ml crude extract with/without adjuvant at week 0, 2, and 4. At week 2 post-immunization, IBDV antibody was detected in the vaccinated chickens and increased to its highest titre at week 4. Virus challenge using the SDH1 isolate did not result in IBDV specific clinical signs when chickens were vaccinated with adjuvant-extract preparation (100% protection) while mock-inoculated chickens died 3-4 days post-inoculation. The above results, taken together, demonstrated that bacterially expressed IBDV VP2 harbors neutralizing epitopes required for induction of protective response, and suggest less detrimental purification procedures for vaccine preparation.