Identification of bovine, ovine and caprine pure and binary mixtures of raw and heat processed meats using species specific size markers targeting mitochondrial genome

در اين پژوهش، از واکنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR) و پرايمرهاي اختصاصي گونه‌اي، براي شناسايي منشأ گوشت‌هاي خالص، مخلوط، خام و حرارت داده شده گاو، گوسفند و بز که در صنايع مواد غذايي فرآوري شده و يا اين که به طور مستقيم مورد استفاده مصرف کننده قرار مي‌گيرند، بهره‌گيري شد. DNA ميتوکندريايي به عنوان الگو در طي واکنش زنجيره‌اي پليمراز با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي مرتبط به هر يک از گونه‌ها مورد تکثير قرار گرفت. پرايمرهاي اختصاصي با منشأ ميتوکندريايي به خوبي توانستند نواحي هدف را در گاو به اندازه ٣۰۰، گوسفند ۱٧۲ و بز ۱۲۲ جفت باز تکثير نمايند. براي تعيين ميزان حساسيت پرايمرهاي مورد استفاده، از مخلوط‌هاي دوتايي گوشت به نسبت‌هاي وزني ۱/۰، ۵/۰، ۱، ۵، 10، ۵۰ و ۱۰۰ درصد استفاده شد. ميزان حساسيت براي تمامي نمونه‌ها 1/0 درصد برآورد شد. در برنامه حرارتي از آب جوش، ۱۲۱ درجه سانتي‌گراد به مدت ۲۰ و ٣۰ دقيقه و ۱۲٧ درجه سانتي‌گراد به مدت ۲۰ دقيقه مشابه شرايط استريلازيسيون، پاستورازيسيون و فرآوري گوشت در کارخانجات صنعتي استفاده شد. تيمار حرارتي طولاني مدت سبب نشد که عملکرد روش به کار گرفته شده تحت تأثير قرار گيرد. نتايج به دست آمده در اين پژوهش، کارآيي استفاده از پرايمرهاي اختصاصي گونه‌اي مبتني بر ژنوم هدف ميتوکندريايي را به منظور شناسايي گوشت‌هاي خالص، مخلوط، خام و حرارت داده شده گاو، گوسفند و بز را با حساسيت و دقت بالا مورد تأييد قرار داد.

A specific polymerase chain reaction (PCR) method was applied for identification of bovine (Bos taurus), ovine (Ovis aries) and caprine (Capra hircus) pure and binary mixtures of raw and heat-processed meats. These meats are used in food industry products and/or for direct consumption of consumers. The mitochondrial DNA was amplified as a template in a PCR reaction by use of specific primers related to each species. Specific primers with mitochondrial origin amplified amplicons with the length of 300, 172 and 122 bp in target regions in cattle, sheep and goat, respectively. For determination of the primer sensitivity a set of binary meat mixtures with 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50 and 100% based on weight ratio was tested. The detection limit was found to be 0.1% for all samples. In heat-processing program boiled water for 20 min, 121 C for 20 and 30 min and 127 C for 20 min by autoclaving was used, similar to the conditions that are used in pasteurization, sterilization and also meat processing in industrial factories. The performance of the method was not affected by prolonged heat treatments. The results obtained in the present study confirmed the efficiency of species specific primers for targeting of mitochondrial genome in order to detect bovine, ovine and caprine pure and binary mixtures of raw and heat processed meats with high sensitivity and accuracy.