Evaluation of an immunoblotting test based on whole tachyzoite lysate for diagnosis of humoral response of domestic cats infected with Toxoplasma gondii, Rh strain

هدف از اين مطالعه، بررسي حضور پادتن‌هاي ايجاد شده در گربه‌ها، متعاقب عفونت با سويه Rh توکسوپلاسما گوندئي با استفاده از روش ايمنوبلات بود. به اين منظور، اقدام به ايجاد عفونت تجربي با استفاده از تاکي زوآيت‌هاي تکثير شده در محيط کشت سلول‌هاي Vero گرديد. پس از آن، تاکي زوآيت‌ها، ليز شده و ابتدا به ژل پلي اکريل آميد و سپس به کاغذهاي PVDF انتقال يافتند. اين کاغذها جهت ارزيابي وجود پادتن‌هاي IgG مورد استفاده قرار گرفتند. در گربه‌هاي آلوده شده، خطوط مثبت تست در محدوده حضور آنتي‌ژن‌هاي سطحي، گرانول‌هاي متراکم و روپتري‌ها مشاهده شدند. خطوط مثبت در گروه کنترل که از محيط کشت حاوي Vero cell هاي بدون تک ياخته دريافت کرده بودند، ديده نشد. نتايج مثبت و منفي، با نتايج تست استاندارد IFAT در توافق کامل بودند. نتايج اين بررسي نشان داد که ايمنوبلات طراحي شده بر مبناي تاکي زوآيت‌هاي کامل، تست تشخيصي مناسبي جهت تشخيص سرولوژيک پادتن‌هاي ضد T. gondii در گربه‌هايي که به تازگي با اين تک ياخته آلوده شده‌اند، مي‌باشد.

This study was aimed to detect anti-Toxoplasma gondii antibodies in cats infected with Rh strain of T. gondii by using an immunoblotting method. For this, cats were experimentally infected using tachyzoites harvested from Vero cell cultures. Tachyzoites were then lysed and transferred to polyacrylamide gels followed by blotting to PVDF membranes. An immunoblotting was performed using these membranes to detect IgG antibodies. Protein bands were detected in regions related to the presence of T. gondii surface antigens, dense granular or rhoptry proteins. No positive bands were detected in serum samples of kittens that received only Vero cell lysates (controls). Positive or negative results were in concordance to the results of IFAT. The results of this study revealed that whole tachyzoite antigen based immunoblotting is an appropriate diagnostic test for serological detection of anti-T. gondii antibodies in recently infected kittens with this Apicomplexan parasite.