PCR-RELP for detecting of Theileria annulata infection in cattle and Hyalomma species in Kermanshah Province, Iran

تيلريوزيس گاوي بيماري مهم نواحي گرمسيري و نيمه گرمسيري است كه خسارات اقتصادي قابل توجهي به صنعت دامپروري ايران وارد مي كند. هدف از اين مطالعه ارزيابي فراواني عفونت تيلريا آنولاتا در گاو و گونه هاي هيالوما در استان كرمانشاه بود. تعداد 138 نمونه خون گاو به صورت تصادفي جمع آوري شد. DNA ژنومي تيلريا آنولاتا استخراج گرديد و قطعه اي به اندازه bp721 از توالي ژن تحت واحد rRNA كد كننده آنتي ژن سطحي مروزويايت 30 كيلو دالتون (30 KDa msa) تكثير شد. محصول تكثير شده توسط آنزيم هاي محدود كننده TaqI، Rasl و AluI هضم شدند. شيوع كلي 44/9درصد (138/13) در گاوهاي نژاد هلشتاين كمتر از يك سال و بيش از 5 سال به ترتيب لمفادنوپاتي (17/1درصد) و رنگ پريدگي مخاط (9/1درصد) بود. پنج گونه كنه سخت از جنس هيالوما (8/18درصد، 750 : 141) شامل گونه هاي هيالوما آناتوليكم آناتوليكم (4/30درصد)، هيالوما آناتوليكم اكسكاواتوم (2/31درصد)، هيالوما مارژيناتوم (8/36درصد)، هيالوما آسياتيكم آسياتيكم (7/0درصد) و هيالوما دتريتوم (7/0درصد) شناسايي شدند. شاخص تعداد كنه براي گونه هاي هيالوما داراي دامنه 01/0 تا 36/0 بود. واكنش زنجيره اي پلي مراز نشان داد كه 3 نمونه از 138 نمونه خون (17/2 درصد) و 19 كنه از 141 كنه هيالوما آلوده به تيلريا آنولاتا بودند. هضم محصول واكنش زنجيره اي پلي مراز نمونه هاي خون الگوي RFLP هضم آنزيمي مشابهي داشتند، ولي الگوي RFLP براي تيلريا آنولاتا از كنه هاي هيالوما آناتوليكم آناتوليكم (21/9 درصد)و هيالوما آناتوليكم اكسكاواتوم (2/4 درصد) متفاوت بود. الگوي RFLP قطعه تكثيري ژن 30 KDa msa تيلريا آنولاتا بيانگر وجود چهار جدايه مختلف تيلريا آنولاتا از گونه هاي هيالوما آناتوليكم آناتوليكم و هيالوما آناتوليكم اكسكاواتوم در منطقه بود.

Bovine theileriosis is important disease in tropical and subtropical areas with great economic losses in livestock husbandry in Iran. The aim of study was to assess the prevalence of Theileria annulata infection in cattle and Hyalomma species of Kermanshah Province, Iran. A number of 138 blood samples were randomly taken from examined cattle. The genomic DNA was extracted and PCR was performed to specifically amplify a 721-bp-long fragment of the 30 Kilo Dalton major merozoite surface antigen (30 KDa msa) of T. annulata. The amplified products were digested with TaqI, Rasl, and AluI restriction enzymes. Overall prevalence was 9.44% (13/138) with lymphadnopathy (1.17%) and pale mucosal membrane (1.9%) in Holstein cattle aged < 1 year and more than 5 years-old, respectively. Five species of genus Hyalomma (18.8%, 141/750) including Hyalomma anatolicum anatolicum (30.4%), H. anatolicum excavatum (31.2%), H. marginatum (36.8%), H. asiaticum asiaticum (0.7%), and H. detritum (0.7%) were identified. The tick indices for each Hyalomma species were ranged from 0.01 to 0.36. PCR findings indicated that 3 out of 138 blood samples (2.17%) and 19 out of 141 Hyalomma ticks (4.13%) were infected with T. annulata. Amplified PCR products from blood samples generated similar RFLP patterns, but different RFLP pattern for T. annulata from H. anatolicum anatolicum (9.21%) and H. anatolicum excavatum (4.2%). The RFLP patterns of the amplified fragment of the 30 KDa msa of T. annulata indicated the circulation of four different T. annulata isolates of H. anatolicum anatolicum and H. anatolicum excavatum in the region.