Isolation and identification of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction (PCR) from affected sheep to Contagious agalactia of Khuzestan province, Iran

مايكوپلاسما آگالاكتيه به عنوان يكي از عوامل اصلي آگالاكسي مسري، يك سندرم عفوني درگوسفند و بز در استان خوزستان (جنوب غرب ايران) است. اين سندرم با علايم ورم پستان، اختلال در توليد شير، ورم مفاصل، سقط جنين و كراتوكونژيكتيويت تشخيص داده مي شود. مطالعه حاضر براي جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما آگالاكتيه با استفاده از روش كشت و واكنش زنجيره اي پليمراز نمونه هاي تهيه شده از گوسفندان در استان خوزستان انجام شده است. 91 نمونه از شير، چشم، گوش، بيني و مايع مفصلي گوسفند تهيه شد. تمام نمونه ها در محيط PPLO براي جداسازي مايكوپلاسما كشت داده شدند. استخراج DNA باكتري به روش فنل – كلرفرم انجام شده و براي آزمايش واكنش زنجيره اي پليمراز و تشخيص جنس مايكوپلاسما در فراگمنت 163bp روي ژن 16S rRNAو فراگمنت 375 bp روي ژن ليپوپروتيين از نمونه هاي كشت داده شده، استفاده گرديد. از 91 نمونه كشت داده شده، 34 مورد (36/37%) مثبت بودند و كلني هاي تيپيك مايكوپلاسما را در محيط كشت PPLO آگار ايجاد كردند و 47 مورد (65/51%) از نظر جنس مايكوپلاسما در واكنش زنجيره اي پليمراز مثبت بودند. 8 مورد (79/8%) نمونه ها از نظر گونه مايكوپلاسما آگالاكتيه در واكنش زنجيره اي پليمراز مثبت بودند. از 91 مورد آزمايش شده، 26 نمونه در روش كشت و واكنش زنجيره اي پليمراز مثبت شدند. 5 نمونه از نظر كشت، MPCR و MAPCR مثبت شدند. 15 نمونه از نظر كشت منفي و در واكنش زنجيره اي پليمراز مثبت شدند در حاليكه تنها 3 نمونه در كشت مثبت و در واكنش زنجيره اي پليمراز منفي شدند. نتايج نشان داده كه بيشتر موارد جداسازي شده مايكوپلاسما آگالاكتيه مربوط به نمونه هاي تهيه شده از چشم و كمترين موارد مربوط به نمونه هاي تهيه شده از گوش و بيني بوده است. مايكوپلاسما آگالاكتيه يكي از عوامل اصلي ايجاد كننده بيماري آگالاكسي مسري است كه براي اولين بار در گوسفند در استان خوزستان تشخيص داده شده است.

Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae) is one of the main causes of contagious agalactia, an infectious syndrome of sheep and goats in Khuzestan province –southwest of Iran that is characterized by mastitis and subsequent failure of milk production, arthritis, abortion and keratoconjunctivitis. This study was carried out to isolation and identification of M. agalactiae with culture and polymerase chain reaction (PCR) method from sheep in Khuzestan province, Iran. A total of 91 samples were collected from milk secretion, eye, ear, nose and joint exudates of sheep. All samples were cultured in PPLO broth supplemented for isolation of M. agalaciae. Extraction of the DNA of bacteria was done by phenol/chloroform method and the PCR assay was applied for detection of Mycoplasma genus in 163bp fragment of 16S rRNA gene and M. agalactiae in 375bp fragment of lipoprotein gene from culture as same as in clinical samples. Out of the 91 samples, 34(37.36%) cultures were shown positive and typical Mycoplasma colonies in PPLO agar culture diagnostic method and 47(51.65%) were scored positive by Mycoplasma genus PCR, 8(8.79%) of the samples were scored positive by using M. agalactiae PCR as diagnostic method. Out of the 91 samples, 26 samples were shown both positive in the culture and PCR, 5 samples were shown both positive in the culture, MPCR and MAPCR. 15 samples were negative in the culture and positive in PCR whereas only 3 samples were positive in culture and negative in PCR. The results showed that the more isolations of M. agalactiae were taken from eye and less in ear and nose samples. M. agalactiae was one of the main factors of contagious agalactia that was detected for the first time from sheep in Khuzestan province.