Isolation and identification of excretory-secretory and somatic antigens from the Oestrus ovis larvae by SDS-PAGE and immunoblotting

استروس اويس يكي از انگل هاي نشخوار كنندگان كوچك با اهميت اقتصادي و از عوامل زيونوز با گزارشات زياد از مياز چشمي آن در انسان از ايران و سايركشورها است. هدف از اين مطالعه جداسازي و شناسايي آنتي ژن هاي سوماتيك و دفعي ترشحي لاروهاي مرحله دوم و سوم (L2 وL3) استروس اويس جدا شده از گوسفندان نژاد عربي منطقه با روش SDS-PAGE و ايمنوبلاتينگ مي باشد. سرم مثبت با علامت گذاري، خون گيري از گوسفندان و مشاهده مستقيم انگل در سر آنها تهيه شد. پروتيين هاي سوماتيك از لاروها ( SL2 و SL3) با سونيكاتور و سانتريفيوژ و مواد دفعي-ترشحي ( ESL2و ESL3) با كشت آنها در محيط RPMI تهيه گرديد. تعيين آنتي ژن هاي ايمونوژن به روش ايمنوبلاتينگ با سرم هاي مثبت انجام شد. در پروفايل پروتييني SL2هشت باند، SL3 بيش از پانزده باند، ESL2 دو باند، ESL3 هفت باند (0/79 تا زير4/14 كيلودالتون) و در ايمنوبلاتينگ با سرم مثبت در SL2 چهار باند، SL3 پنج باند، ESL2 يك باند، ESL3 چهار باند ( شامل باندهاي 0/58، 0/42، 0/47، 0/29 و 0/28 كيلو دالتون) بدست آمد. نتايج نشان داد كه در ميان پروفايل هاي پروتييني، پروتيين 0/28 كيلو دالتوني مشترك ترين آنتي ژن است. با اين حال پروتيين آنتي ژن 0/29، 0/58 كيلودالتوني، پروتيين مشترك در الگوي الكتروفورزي پروتيين هاي سوماتيك و دفعي ترشحي لاروهاي L2 وL3 بود. آنتي ژن 0/42 كيلودالتوني فقط در ايمونوبلات شناسايي شد، ولي در پروفايل پروتييني سوماتيك و دفعي ترشحي لاروها ديده نشد. بنابراين آنتي ژن هاي (0/29، 0/42 و 0/58 كيلودالتوني نيز (علاوه بر 0/28 كيلودالتوني) مي توانند در مطالعات بعدي به منظور بررسي اثرات محافظتي و در روش هاي سرمي تشخيصي استفاده شوند.

Oestrus ovis is an economically important parasite of small ruminants and a zoonotic parasite with many reports of ophthalmomyiasis in human from Iran and other countries. The aim of the peresent study was the isolation and identification of excretory-secretory (ES) and somatic (S) antigens of O. ovis second and third stage larvae (L2, L3) collected from Arabi sheep breeds located in southwest of Iran. Positive sera were prepared by marking the sheep, taking blood sample and direct observation of the parasite in the head. Somatic antigens of the larvae (SL2, SL3) were prepared by sonication. Larval excretory-secretory antigens (ESL2, ESL3) were prepared by incubation the larvae in RPMI-1640 RPMI medium. Electrophoretic protein profiles of ESL2 two, ESL3 seven, SL2 eight, SL3 fifteen bands (from 79.0 to below 14.4 KDa) were shown. In immunoblotting with positive sera, four common bands in SL2 and SL3 at 58, 42.0, 29.0 and 28.0 kDa, one specific band in SL3 at 47.0 kDa and one band in ESL2, at 28.0 kDa, and three bands in ESL3 at 58.0, 42.0, 29.0 and 28.0 kDa were recognized. Among the profiles, the 28 kDa protein was the most common antigenic component. Nevertheless, the antigenic proteins 29, 58 kDa were a common protein in electrophoretic patterns of both S and ES proteins of L2 and L3 but, 42.0 kDa antigen the only one detected in immunoblot but not in S and ES protein profiles of the larvae. Therefore, the antigens 29.0, 42.0 and 58.0 kDa can be used for further studies of protective effects and serological diagnostic methods.