Isolation and G-typing of Rotaviruses from diarrheal Calves in Tehran and Alborz provinces, Iran

روتا ويروس هاي گروه A عامل عمده ايجاد اسهال در گوساله هاي زير يك ماه بوده و همه ساله خسارات اقتصادي هنگفتي ببار مي آورد. جهت تشخيص سريع بيماري مي توان از روش هاي سرولوژي و مولكولي استفاده كرد ولي براي جداسازي ويروس به روش هاي خاص كشت سلولي و نيز تيره سلولي مناسب احتياج است. در اين تحقيق تعداد 41 نمونه از گوساله هاي اسهالي تا سن يك ماه، از گاوداريهاي صنعتي و نيمه صنعتي استان هاي تهران و البرز تهيه شد. نمونه ها در تشخيص آلودگي روتا ويروسي با انجام روش RT-PCR با پرايمرهاي ژن VP6، مثبت بودند. پس از آماده سازي و تلقيح بر كشت سلولي MA104، در لوله هاي كشت سلول در دستگاه Roller Tube Culture و نيز در فلاسك هاي كشت سلول ثابت، ضايعات سلولي(CPE) مشاهده گرديد. كشت هاي واجد ضايعات سلولي، با انجام روش RT-PCR دو مرحله اي با استفاده از پرايمرهاي ژن VP6 مورد تاييد قرار گرفتند. جهت ژنوتايپينگ G، از پرايمرهاي ژن VP7، روش Semi-nested PCR انجام گرفت كه 11 نمونه از نظر ژنوتايپ، G6 و 2 نمونه G10 بودند. اين اولين گزارش جداسازي و تعيين هويت روتا ويروس هاي عامل بيماري اسهال ويروسي گوساله ها در ايران مي باشد. نتايج اين بررسي اشاره مي كند كه در تهيه واكسن مناسب براي پيشگيري از اسهال روتا ويروسي در ايران مي توان از اين دو تايپ روتا ويروسي، بعنوان سوش هاي غالب استفاده كرد.

Rotaviruses group A are the major cause of diarrhea in calves under one month and every year causes enormous economic losses. Serological and molecular techniques can be used for rapid detection of rotaviruses but virus isolation requires specific methods of cell culture and suitable cell lines. In this study, 41 samples were collected from diarrheal calves up to the age of one month, from industrial and semi-industrial farms in Tehran and Alborz provinces. The samples were positive by RT-PCR on VP6 gene. After preparation and inoculation onto MA104 cells in roller tube culture and constant cell culture system, the cytopathic effect (CPE) was observed. Eligible cultured with CPE, were confirmed by two-step RT-PCR using VP6 gene primers. Semi-nested PCR using VP7 gene primers was also performed for G-genotyping in which 11 and 2 samples were detected as G6 and G10, respectively. This is the first report on isolation and identification of rotaviruses, one of the causative agents of viral diarrhea in Iran. The results of this research suggest that, these two types, can be used as the dominant strains for manufacturing a suitable vaccine against the rotaviruses in Iran.