Dual Promoter Vector Construction for Simultaneous Gene Expression Using Spliced Overlap Extension by Polymerase Chain Reaction (SOE-PCR) Technique

سه سیستم مختلف شامل بی­سیسترونیک، dual-vector و وکتور با دو پروموتور برای بیان همزمان دو پروتئین مختلف و همچنین بررسی اثر متقابل آنها وجود دارد. سیستم­های بی­سیسترونیک و dual-vector در مقایسه با سیستم وکتور با دو پروموتور معایبی دارند. در این مقاله روش ساده­ای بر اساس تکنیک SOE-PCR برای ساخت یک وکتور با دو پروموتور توضیح داده شده است. این وکتور می­تواند برای بیان همزمان پروتئین­های Omp25 و Omp31 به عنوان دو آنتی ­ژن عمده بروسلا ملیتنسیس، استفاده شود. برای ساخت وکتور با دو پروموتور، دو جفت مگا-پرایمر دارای توالی جایگاه­های محدودالاثر آنزیمی، پروموتور T7، اپران لک و جایگاه اتصال ریبوزوم (RBS)، در SOE-PCR مورد استفاده قرار گرفتند. وکتور ساخته شده در این مطالعه می­تواند برای بیان همزمان ژن­های دیگر در میزبان­های بیانی باکتریایی گوناگونی استفاده گردد

There are two different co-expression systems including bicistronic; dual-vector or two-promoter to express two different genes simultaneously and also to study protein-protein interactions. Bicistronic system has disadvantages e.g. compared with two-promoter system. In this paper, a simple method based on spliced overlap extension by polymerase chain reaction (SOE-PCR) technique was demonstrated for construction of two-promoter vector to express two genes equally. To construct two-promoter vector, two pairs of mega-primer containing enzymatic restriction sites, T7 promoter, Lac operator and ribosome binding site (RBS) sequences were used in SOE-PCR. The constructed vector can be used in order to co-expression of other genes properly in a variety of bacterial expression hosts.