Effect of various concentrations of Minimal Essential Medium vitamins (MEM vitamins) on development of sheep oocytes during in-vitro maturation

زمينه: بهبود فرمولاسيون محيط هاي كشت باعث افزايش توانايي حفظ رويان در سراسر دوره كشت تا پيش از لانه گزيني و لانه گزيني شده است. هدف: ارزيابي غلظت هاي مختلف MEM ويتامين ها در طول بلوغ آزمايشگاهي تخمك ها و بررسي روند نمو آتي رويان. مواد و روش ها: تخمدان هاي گوسفندي از كشتارگاه جمع آوري و به آزمايشگاه انتقال يافتند. تخمك ها در محيط مايع اوويداكتي مصنوعي (ساف) بلوغ مكمل شده با گونادوتروفين كوريونيك اسب، گونادوتروفين كوريونيك انسان و فاكتور رشد اپيدرمال كه با غلظت هاي مختلف از MEM ويتامين ها (كنترل، 5/0، 1، 5/1) همراه شده براي مدت 24 ساعت بالغ شدند. كمپلكس كومولوس- تخمك بالغ فرضي با اسپرماتوزوا ناحيه دم اپيديديم قوچ در محيط ساف لقاح مكمل شده با 10% سرم گوسفند فحل براي مدت 18 ساعت همكشتي شدند. رويان ها در محيط ساف كشت 1 براي مدت 48 ساعت و سپس در محيط ساف كشت 2 براي شش روز كشت گرديدند. نتايج: افزودن غلظت هاي 5/0 و 1 از MEM ويتامين ها به صورت معني داري (05/0 > p) نمو رويان ها را تا مرحله بلاستوسيست (به ترتيب: 62/21% و 33/22%) در مقايسه با غلظت 5/1 از MEM ويتامين ها (59/15%) افزايش داد، اما بين گروه كنترل و غلظت هاي 5/0 و 1 از MEM ويتامين ها در درصد رويان هايي كه به مرحله بلاستوسيست نمو يافته بودند اختلاف معني داري وجود نداشت (به ترتيب: 50/19%، 62/21% و 33/22%). نتيجه گيري: به نظر مي رسد كه افزودن غلظت 5/1 از MEM ويتامين ها اثرات زيان باري بر درصد بلاستوسيست دارد.

Abstract Background: Improvements in culture media formulations have led to an increase in the ability of sheep embryo in culture throughout the preimplantation period. Objective: This study was carried out to evaluate the effects of various concentrations of MEM vitamins during in vitro maturation of sheep oocytes and subsequent embryo development. Materials and Methods: Sheep ovaries were collected from a slaughterhouse and transported to the laboratory. Oocytes were matured in SOF medium supplemented with, eCG, hCG and EGF in various concentrations of MEM vitamins (control, 0.5, 1 and 1.5? ) for 24h. The cumulus oocyte compelex (COCs) were co-incubated with epididymal spermatozoa of post mortem rams in synthetic oviduct fluid fertilization (SOFF) medium with 10% heat inactivated estrous sheep serum for 18h. Embryos were cultured in synthetic oviduct fluid culture 1 (SOFC1) medium for 48h followed by cultured in synthetic oviduct fluid culture 2 (SOFC2) medium for six days. Results: Addition of 0.5 and 1 ? MEM vitamins significantly increased (P < 0.05) overall blastocyst development (21.62% and 22.33%; respectively) compared with 1.5?MEM vitamins (15.59%), but there was no difference between control, 0.5 and 1?MEM vitamins in the percentage of embryos successfully developing to the blastocyst stage (19.50%, 21.62% and 22.33% respectively). Conclusion: It seems that addition of 1.5 ? of MEM vitamins has detrimental effect on blastocyst rate.