ارزيابي اثربخشي ايمني‌زايي و حفاظتي ptfA نوتركيب پاستورلا مولتوسيدا پرندگان

پاستورلا مولتوسيدا پرندگان عامل مسبب وباي طيور است كه يكي از بيماري‌هايي مي‌باشد كه توسعه صنعت طيور را تحت تأثير قرار مي‌دهد. به منظور مطالعه اثربخشي واكسن زير واحد نوتركيب ساخته شده با ژن PtfA پاستورلا مولتوسيدا پرندگان، قطعه ژن تكثير يافته به روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز از پاستورلا مولتوسيدا پرندگان به داخل حامل بيان پروكاريوتي pET32a كلون شد، و pET23aptfA پلاسميد نوتركيب تهيه گرديد. ژن در اي. كولاي BL21(DE3) بيان و پروتئين هدف rPtfA خالص سازي شد. سپس پروتئين تخليص شده با ادجوانت فروند مخلوط شده و واكسن زير واحد نوتركيب تهيه شد. سه گروه جوجه تحت عنوان rPtfA، واكسن زنده تخفيف حدت يافته و PBS به ترتيب با واكسن زير واحد نوتركيب، واكسن زنده تخفيف حدت يافته، و PBS واكسينه شدند. آنتي بادي‌هاي سرم، تكثير لنفوسيت‌هاي خون محيطي (PBLP) و سطح اينترفرونγ (IFNγ) مترشحه از لنفوسيت‌هاي خون محيطي مورد آزمايش قرار گرفتند. در نهايت، جوجه‌هاي ايمن شده با پاستورلا مولتوسيدا حاد پرندگان به چالش كشيده شدند و ميزان حفاظت اندازه‌گيري شد. ELISA غير مستقيم نشان داد كه سطوح آنتي بادي‌ها در گروه‌هاي rPtfA و واكسن زنده تخفيف حدت يافته به طور معني‌داري بيشتر از ساير گروه‌ها بودند (P 0.01)، و اولي اندكي كمتر از دومي بود. آزمايش‌هاي PBLP و IFNγ نشان دادند كه مقدار SI و سطوح IFNγ القا شده توسط ConA در دو گروه واكسن به طور معني‌داري بيشتر از گروه‌هاي PBS (P 0.01) بودند، و گروه واكسن تخفيف حدت يافته بيشتر از گروه rPtfA بود. ميزان حفاظت واكسن rPtfA و واكسن زنده تخفيف حدت يافته به ترتيب 45% و 75% بودند. نتايج نشان دادند كه واكسن زير واحد نوتركيب PtfA توانست سطح ايمني و اثر حافظتي در جوجه‌هاي واكسينه شده را القا كند، اما به ميزان اندكي رضايت بخش بود.

Avian Pasteurella multocida is the causative agent of fowl cholera, a disease much affecting the poultry industry. In order to study the efficacy of the recombinant subunit vaccine constructed with ptfA gene of avian P. multocida, the ptfA gene fragment amplified by PCR from avian P. multocida was cloned into the prokaryotic expression vector pET32a and the recombinant plasmid pET32a-ptfA was obtained. The pET32a-ptfA was expressed in Escherichia coli BL21(DE3) and the target protein rPtfA was purified. The purified protein was then mixed with Freund’s adjuvant and the recombinant subunit vaccine was obtained. Three groups of chickens labeled as rPtfA, attenuated live vaccine and PBS were vaccinated with the recombinant subunit vaccine, attenuated live vaccine and PBS, respectively. Serum antibodies, peripheral blood lymphocyte proliferation (PBLP) and interferonγ (IFNγ) level secreted by peripheral blood lymphocyte were tested. The immunized chickens were finally challenged with virulent avian P. multocida and the protection rate was counted. Indirect ELISA showed the levels of antibodies in rPtfA and attenuated vaccine groups were most significantly higher than the other groups (P<.01), and the former was slightly lower than the latter. Peripheral blood lymphocyte proliferation experiments and IFNγ experiments indicated that SI value and the levels of IFNγ induced by ConA in the two vaccine groups were significantly higher than those of the PBS groups (P<.01), and that the attenuated vaccine group was higher than the rPtfA group. The protection rates of rPtfA and attenuated live vaccines were 45% and 75%, respectively. The results indicated that the PtfA recombinant subunit vaccine was capable of improving the immunity level and inducing a protective effect for the vaccinated chickens, but it was barely satisfactory.