بررسي حضور باكتري ليستريا منوسايتوژنز در نمونه‌هاي شير خام در شهرستان مشهد، ايران

هدف از انجام اين مطالعه مقدماتي تعيين ميزان آلودگي شير خام به باكتري ليستريا منوسايتوژنز بود. در اين مطالعه به صورت تصادفي تعداد يكصد نمونه شير خام كه به مجتمع شير پاستوريزه پگاه مشهد تحويل گرديده بود جمع‌آوري گرديد. جهت شناسايي و تشخيص جنس ليستريا و گونه منوسايتوژنز نمونه‌ها ابتدا در محيط آبگوشت غني كننده ليستريا در دماي يخچال غني‌سازي گرديد و سپس در محيط آگار آكسفورد حاوي مكمل كشت داده شد. جهت تشخيص نهايي، تست PCR چند گانه با استفاده از دو جفت پرايمر انجام گرديد. پرايمرهاي prs اختصاصي ژن Putative phosphoribosyl pyrophosphate synthetase جهت تشخيص جنس ليستريا و پرايمرهاي LM lip1 اختصاصي ژن prf A جهت تشخيص گونه منوسايتوژنز مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از اين روش ميزان آلودگي شير خام به باكتري ليستريا منوسايتوژنز 4% تعيين گرديد. حساسيت پرايمرهاي مورد استفاده cfu ml 1 103 × 5/3 و ويژگي آن‌ها 100% تعيين گرديد. با توجه به حساسيت و ويژگي بالاي روش m PCR مورد استفاده، اين روش جهت تشخيص باكتري ليستريا منوسايتوژنز از كلني‌هاي مشكوك توصيه مي‌گردد.

The purpose of this preliminary study was to determine the prevalence of raw milk contamination with Listeria monocytogenes. In this study, 100 bulk tank milk sles were collected randomly and delivered to Pegah Pasteurization Factory in Mashhad.For isolation and identification of L. monocytogenes, the sles were first enriched using cold enrichment method in Listeriaenrichment broth, followed by plating onto supplemented Oxford agar. For final identification of suspected colonies a multiplex PCR assay, using two pair of primers was employed. The prsprimers are specific for putative phophoribosyl pyrophosphate synthetase (prs) gene of Listeriaspp. and the LM lip1primers are specific for prfA gene of its monocytogenesserovar. Using this method, the contamination of raw milk with L. monocytogeneswas determined to be 4% and the sensitivity of the primers was 3.5 × 10³ cfu ml^ 1, and the specificity was determined to be 100%. Considering the high specificity and sensitivityof the employed multiplex PCR assay, it is recommended to use this method for the identification of suspected colonies of Listeriaspp. and L. monocytogenes.