Improvement of vitrification of in vitro produced buffalo embryos with special reference to sex ratio following vitrification

انجماد و تعيين جنسيت جنين‌ها با فن آوري‌هاي انتقال جنين تجاري ادغام شده‌اند. به منظور بهبود اثربخشي انجماد جنين‌هاي بوفالوي توليد شده در شرايط آزمايشگاهي، دو آزمايش انجام گرفت. آزمايش اول اثر زمان در معرض بودن (دو و سه دقيقه) و مرحله تكامل (مورولا و بلاستوسيست‌ها) را بر زنده ماني و تكامل جنين‌هاي بوفالوي منجمد بررسي نمود. جنين‌هاي از لحاظ مورفولوژيكي طبيعي و ميزان زنده ماني (انبساط مجدد) به طور قابل ملاحظه‌اي (P<0.001) زماني كه مورولاهاي منجمد به مدت 2 دقيقه در مقايسه با مدت زمان سه دقيقه در معرض بودند، افزايش يافتند. از سوي ديگر، بلاستوسيت‌هاي از لحاظ مورفولوژيكي نرمال و ميزان زنده ماني به طور معني‌داري (P<0.001) زماني كه سه دقيقه در مقايسه با دو دقيقه در معرض قرار گرفتند، افزايش يافتند. هر چند،‌ تفاوت معني‌داري بين دو مرحله تكاملي (مورولا و بلاستوسيست‌ها) از لحاظ درصد جنين‌هاي به لحاظ مورفولوژيكي نرمال و ميزان انبساط مجدد بعد از 24 ساعت كشت وجود نداشت. آزمايش دوم با هدف ارزيابي اثر زنده ماني بعد از انجماد بر نسبت جنسي جنين‌هاي بوفالو و اينكه آيا جنين‌هاي نر يا ماده به طور متفاوتي از انجماد در امان مي‌مانند، انجام گرفت. تعداد 61 بلاستوسيست به مدت سه دقيقه با شرايط سرما محافظ مشابه با آزمايش اول منجمد شدند. درصدهاي بالاتري از نرها از لحاظ جنين‌هاي زنده نسبت به جنين‌هاي مرده ثبت گرديد؛ هر چند، تفاوت بين جنين‌هاي مرده و زنده در نسبت جنسي نر معني‌دار نبود. در نتيجه، زنده ماني بعد از گرم شدن و تكامل مورولاها و بلاستوسيست‌هاي توليد شده در شرايط آزمايشگاهي تحت تأثير زمان در معرض قرارگيري بودند ولي تحت تأثير مرحله تكاملي جنين‌ها قرار نگرفتند. قابليت زنده ماني اثر معني‌داري بر روي نسبت جنسي بلاستوسيست‌هاي منجمد نداشت، اگرچه تعداد نرها در ميان جنين‌هاي زنده در مقايسه با جنين‌هاي مرده بيشتر بود.

Cryopreservation and sexing of embryos are integrated into commercial embryo transfer technologies. To improve the effectiveness of vitrification of in vitro produced buffalo embryos, two experiments were conducted. The first evaluated the effect of exposure time (2 and 3 min) and developmental stage (morula and blastocysts) on the viability and development of vitrified buffalo embryos. Morphologically normal embryos and survival rates (reexpansion) significantly increased when vitrified morulae were exposed for 2 min compared to 3 min (P<0.001). On the other hand, morphologically normal and survival rates of blastocysts significantly increased when exposed for 3 min compared to 2 min (P<0.001). However, there were no significant differences between the two developmental stages (morulae and blastocystes) in the percentages of morphologically normal embryos and reexpansion rates after a 24 h culture. The second experiment aimed to evaluate the effect of viability on the sex ratio of buffalo embryos after vitrification and whether male and female embryos survived vitrification differently. A total number of 61 blastocystswere vitrified for 3 min with the same cryoprotectant as experiment 1. Higher percentages of males were recorded for live as compared to dead embryos however, this difference was not significant. In conclusion, the postthaw survival and development of in vitro produced morulae and blastocysts were found to be affected by exposure time rather than developmental stage. Survivability had no significant effect on the sex ratio of vitrified blastocysts nevertheless, the number of surviving males was higher than deadmale embryos.