نگهداري سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب در شرايط كشت مختلف

سلول‌هاي بنيادي جنيني از توده سلولي داخلي (ICM) بلاستوسيست استحصال شده و با توانايي خودنوزايي نامحدود و پرتواني خود مشخص مي‌شوند. تاكنون فقط تعداد محدودي گزارش از جداسازي سلول‌هاي بنيادي جنيني در حيوانات و به ويژه اسب ارائه شده است، در حاليكه جداسازي سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب به منظور بهره‌گيري از آن‌ها در بيوتكنولوژي و درمان بيماري‌ها از اهميت ويژه‌اي برخوردار است. در مطالعه اخير، تلاش شد تا سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب از بلاستوسيست تشكيل شده در رحم جدا شده و خصوصيت پرتواني آن‌ها در شرايط كشت مختلف حفظ شود. سلول‌هاي بنيادي جنيني اوليه اسب بر روي سلول‌هاي فيبروبلاست جنيني موش قادر به تكثير و خودنوزايي بودند. مطالعه ايمنوهيستوشيمي سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب در پاساژ پانزدهم نشانگر وجود ماركرهاي SSEA 1، Oct 4، TRA1 60، GCTM 2 و TRA1 81 در برخي از سلول‌هاي كلوني‌ها بود. در ادامه به منظور بهينه نمودن شرايط كشت سلولي، سلول‌هاي بنيادي جنيني اوليه در محيط كشت پايه واجد فاكتورهاي رشد مختلف: 1) فقط hLIF، 2) فقط bFGF، 3) هم hLIF و هم bFGF و 4) بدون وجود هيچ فاكتور رشد در حضور و يا عدم حضور سلول‌هاي حمايت كننده هترولوگ (MEF) كشت داده شدند. نتايج حاصله نشان داد كه سلول‌هاي حمايت كننده هترولوگ براي حفظ حالت تمايز نيافته سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب ضروري هستند و مورفولوژي سلول‌هاي بنيادي جنيني بدون توجه به وجود و يا عدم وجود hLIF حفظ مي‌شود. يافته‌هاي ما پيشنهاد مي‌كند كه hLIF نه يك فاكتور ضروري و نه يك فاكتور منفي براي رشد سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب مي‌باشد؛ به نظر مي‌رسد كه bFGF تاثير منفي داشته و تركيب توامان اين دو فاكتور قادر به بهبود وضعيت شرايط كشت سلول‌هاي بنيادي جنيني اسب نمي‌باشد.

Embryonic stem cells (ESCs) are originally derived from the ICM of blastocysts and are characterized by their ability to self renew and their pluripotencies. Only a few reports have been published on ESC isolations and line establishment in animals, even fewer in horses. However, it is still important to isolate equine ESCs for animal biotechnology and therapeutic applications. In the present study, we tried to derive horse ESC lines from the ICM of blastocysts fertilized in vivo and maintain their pluripotencies in different conditions. The primary horse ESCs were able to self renew when they were cultured in basic medium on γ irradiated MEFs. After 15 passages, immunohistochemistry of the putative horse ESCs showed that some cells in the colonies were positive for Oct 4, SSEA 1, GCTM 2, TRA 1 60 and TRA 1 81. Moreover, to optimize the culture conditions, these putative horse ESCs were cultured in basic medium supplemented with human leukemia inhibitory factor (hLIF) only, human basic fibroblastic growth factor (hbFGF) only, or hbFGF plus hLIF with or without heterologous (MEF) feeder cells. Based on our results, the heterologous feeder (MEF) cells are necessary to maintain the undifferentiated state for horse ESCs, and ESC like cell morphology of horse ESCs were well maintained in the basic medium supplemented with or without hLIF. This result suggested that hLIF was neither prerequisite nor negative for maintenance of horse ESCs bFGF seemed to be negative for maintenance of horse ECSs and the combination of hLIF and bFGF was unable to improve the culture condition.