مطالعه مقايسه‌اي از اثرات محيط كشت، سرم و FSH روي رشد و بلوغ فوليكول‌هاي پري آنترال موش نژاد سرين و اووسيت‌هاي آن در محيط آزمايشگاهي (in vitro)

دست‌يابي به سيستم كشت پيشرفته براي فوليكول‌هاي پري آنترال در فناوري زيستي مربوط به توليد تعداد بالاي اووسيت و ايجاد جنين آزمايشگاهي و انتقال آن بسيار مهم است. براي دست‌يابي به اين هدف، مطاله حاضر به بررسي كشت فوليكول‌هاي پري آنترال در حضور محيط كشت‌ها، سرم و غلظت‌هاي متفاوت FSH پرداخته است. فوليكول‌هاي پري آنترال موش نژاد سرين با سن 6 هفته به اندازه 5 ± 95 ميكرومتر در سه نوع محيط كشت NCSU23، TCM199 و L 15 براي 6 روز كشت داده شد. براي محيط كشت TCM199 افزايش در قطر فوليكول (115 ميكرومتر)، بقاء (39%)، بلوغ اووسيت (32%) و GVBD (29%) در مقايسه با دو محيط كشت ديگر مشاهده گرديد (P<0.05). كشت شش روزه افزايش رشد فوليكول‌ها در مقايسه با روزهاي دو، چهار و هشت روز نشان داد (P<0.05). همچنين اثرات مقايسه‌اي FCS، PGS، ESFCS و hpgMS با غلظت‌هاي متفاوت (1، 2، 5 و 10%) مورد بررسي قرار گرفت. اين آزمايش با سرم و محيط كشت مناسب در حضور mIU/ml 100 از FSH تكرار گرديد. مشاهده شد كه 5% از FCS بيشترين افزايش را در قطر فوليكول (134 ميكرومتر)، بقاء (52%)، بلوغ اوسيت (49%) و GVBD (45%) در مقايسه با كنترل و ديگر انواع سرم نشان داد (P<0.05). در حالي كهmIU/ml 100 از FSH به همراه 5% FCS در محيط كشت TCM199 افزايش مشخصي در قطر فوليكول (197 ميكرومتر)، بقاء (96%)، بلوغ اووسيت (91%) و ) GVBD67%؛ (P<0.0001 را نشان داد. بنابراين، در مطالعه حاضر شرايط محيط كشت مناسب براي رشد فوليكول پري آنترال و اووسيت در آزمايشگاه معرفي گرديد.

Developing a culture system for preantral follicles has important biotechnological implications due to the potential to produce a large number of oocytes for embryo production and transfer. To accomplish this goal, the present study was aimed to culture preantral follicles in the presence of different media, sera and FSH concentrations. Six week old preantral follicles (95 ± 5 μm) were cultured in North Carolina State University medium 23 (NCSU23), tissue culture medium 199 (TCM199) and leibovitz 15 medium (L 15) for 6 days. Tissue culture medium 199 showed a significant increase in the follicle diameter (115 μm), survival (39%), oocyte maturation (32%) and germinal vesicle breakdown (GVBD) (29%) rates as compared to L 15 and NCSU23 (P<0.05). A 6 day culture showed increased follicular growth as compared to 2, 4 and 8 days (P<0.05). When the experiment was run with 1, 2, 5 and 10% fetal calf serum (FCS), prepubertal gilt serum (PGS), embryonic stem cell fetal calf serum (ESFCS) and hypogonadal mouse serum (hpgMS), the 5% FCS showed increased follicle diameter (134 μm), survival (52%), oocyte maturation (49%) and GVBD (45%) as compared to control and other types of sera used (P<0.05). While 100 mIU/ml FSH + 5% FCS in TCM199 showed a significant increase in follicle diameter (197 μm), survival (96%), oocyte maturation (91%) and GVBD (67%: P<0.0001). So, it is concluded that the TCM199 medium, with the addition of 100 mIU/ml FSH and 5% FCS, is appropriate for the optimal in vitro growth of Syrian mice preantral follicles and enclosed oocytes.