ارزيابي مولكولي پروتئين M2 ويروسهاي آنفلوانزاي تحت تيپ H9N2 ايران به منظور رديابي موتاسيون هاي مقاومت به داروهاي گروه آدمانتان

زمينه مطالعه: ويروس‌هاي آنفلوانزاي A تحت تيپ H9N2 داراي گسترش جهاني مي‌باشند. آدمانتان‌ها گروهي از داروهاي ضدويروس مي‌باشند كه هم در پيشگيري و هم درمان عفونت‌هاي ناشي از ويروس‌هاي آنفلوانزاي تيپ A كاربرد دارند. اين داروها كانال يوني پروتئين M2 را مهار كرده و از اين طريق بر تكثير ويروس تأثير مي‌گذارند. هدف: هدف اصلي اين مطالعه ارزيابي ژن M ويروس‌هاي آنفلوانزاي پرندگان تحت تيپ H9N2 به منظور رديابي موتاسيون‌هاي مقاومت به داروهاي گروه آدمانتان مي‌باشد. روش كار: در طول سال‌هاي 2012 تا 2013، بيش از 100 نمونه مشكوك به آنفلوانزا از مناطق مختلف جغرافيايي ايران جمع‌آوري شد. نمونه‌ها پس از آماده سازي از طريق كيسه آلانتوئيك به جنين‌هاي 119 روزه ماكيان تلقيح شدند. 11 نمونه ويروس آنفلوانزاي پرندگان بودند. تحت تيپ H9N2 ويروس‌هاي جدا شده توسط تست RTPCR اختصاصي تأييد شدند. سپس كل ژن M جدايه‌ها توسط RTPCR اختصاصي تكثير شده و براي تعيين توالي نوكلئوتيدي ارسال شدند.  نهايتاً، سكانس‌هاي بدست آمده جهت ارزيابي وجود موتاسيون‌هاي مقاومت مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج: 8 نمونه از 11 نمونه مورد بررسي داراي موتاسيون‌هاي مقاومت دارويي بودند. از اين تعداد 4 ويروس در سال 2013 و 4 ويروس در سال 2012 جدا شده بودند. سايت‌هاي متفاوت موتاسيون در سال‌هاي مختلف مشاهده شد. نتيجه‌گيري‌نهايي: مطالعه اخير شواهدي محكمي از حضور مقاومت دارويي در ويروس‌هاي آنفلوانزاي تحت تيپ H9N2 در حال گردش در صنعت طيور ارائه نموده است. از اينرو نگراني خطر بازآرايي ژنتيكي و انتقال قطعه M ژنوم ويروس‌هاي آنفلونزاي طيوري و انساني وجود دارد.

BACKGROUND: The H9N2 subtype of influenza A viruses is considered to be widespread in poultry industry. Adamantane is a group of antiviral agents which is effective both in prevention and treatment of influenza A virus infections. These drugs inhibit M2 protein ion channel which has role on viral replication. OBJECTIVES: The main objective of this study is to evaluate M gene of avian influenza viruses (AIVs) of H9N2 subtype in order to find adamantane drug resistance mutations. METHODS: Over 100 suspected samples were collected from different geographical regions of Iran during 2012-2013. Samples were injected via allantoic sac of 9-11 day-old chicken embryos. A total of 11 out of 100 were AIV. The H9N2 subtype was confirmed by specific RT-PCR. The RT-PCR was conducted for full length M gene. PCR amplified products were purified and then conducted for commercial direct sequencing. Finally, sequences were checked for possible sites of adamantane resistance mutations. RESULTS: Overall, 8 out of 11 viruses harbored the adamantane resistance-associated mutations. Of which, four viruses were isolated in 2013 and four viruses in 2012. Two different resistance- associated mutations were observed during different years. CONCLUSIONS: The present study provided clear evidence concerning resistance AIVs of H9N2 subtype that were circulating in Iranian poultry sector. This concern is always present as M segment might be introduced into human influenza viruses by reassortment phenomenon.