ايجاد يك شرايط كشت مناسب براي تكثير و غنيسازي سلولهاي بنيادي اسپرم ساز جوجه در آزمايشگاه

سلولهاي بنيادي اسپرمساز پرندگان پتانسيل بالقوهاي به عنوان مدل براي مطالعات پايهاي زيستشناسي سلولهاي بنيادي اسپرمساز و نيز استفاده براي اهداف بيوتكنولوژي دارند. با اين حال تعداد اندك اين سلولها و حضور سلولهاي سوماتيك بيضهاي در كنار سلولهاي بنيادي اسپرمساز، كاربردهاي اين سلولها را محدود نموده است. بنابراين، اين مطالعه براي اولين بار، به منظور B بررسي اثر يك محيط كشت فاقد سرم و غني شده با تركيبي از انواع فاكتورهاي رشد و نيز ، بر تكثير و غنيسازي جمعيت 27 سلولهاي بنيادي اسپرمساز جوجه تازه متولد شده تحت شرايط آزمايشگاهي، انجام شد. براي اين منظور سلولهاي بافت بيضه و همچنين EGF و LIF ،bFGF ،GDNFجوجه تازه متولد شده در يك محيط كشت فاقد سرم و غني شده با فاكتورهاي رشد به عنوان جايگزيني براي سرم، كشت داده شدند. حضور سلولهاي بنيادي اسپرمساز در كشتهاي سلولي حاصل از بافت B27 ASZ بيضه بوسيله تشخيص فعاليت آنزيم آلكالين فسفاتاز و بيان ژنهاي 1 ،POU GPR و CVH ، 5F1 مورد بررسي قرار 125 گرفت. قبل از تيمار با محيط كشت غني شده، تعداد اندكي از خوشهها و كلونيهاي مرتبط با سلولهاي بنيادي اسپرمساز در با فاكتورهاي ذكر شده در بالا، شديدا منجر به القاء تكثير DMEM كشتهاي سلولي ظاهر شدند. غني شدن محيط كشت سلولهاي بنيادي اسپرمساز جوجه شد. بعلاوه، تحت اين شرايط كشت، اتصال و ماندگاري سلولهاي سوماتيك بيضهاي كاهش يافت و بنابراين به تدريج تعداد آنها در محيط كشت كاهش يافت. سلولهاي بنيادي اسپرمساز غني شده براي فعاليت الكالين ASZ فسفاتاز و بيان ژنهاي 1 ،POU GPR و CVH ، 5F1 مثبت بودند. اين مطالعه نشان ميدهد كه محيط كشت غني 125 B شده با فاكتورهاي رشد ذكر شده در بالا و نيز باعث القاء تكثير و غنيسازي جمعيت سلولهاي بنيادي اسپرمساز در كوتاه 27 مدت تحت شرايط آزمايشگاهي ميشود.

Poultry spermatogonial stem cells (SSCs) have the potential to serve as a model for studying the basic biology of SSC and they can also be used for biotechnological purposes. However, the small number of SSCs and the presence of the testicular somatic cells with SSCs have limited their applications. Therefore, this study was undertaken for the first time to investigate the effect of a serumfree medium supplemented with a combination of specific growth factors and B27 on the proliferation and enrichment of newborn chicken SSCs in vitro. Newborn chicken testicular cells were cultured in a serumfree DMEM, supplemented with GDNF, bFGF, LIF, and EGF growth factors and also B27 as an alternative for FBS. Presence and maintenance of the SSCs in the enriched cultures were evaluated by detection of alkaline phosphatase (AP) activity and ASZ1, POU5F1, CVH and GPR125 gene expression. A small number of clusters and colonies were emerged in testicular cell cultures before treatment with the enriched cell culture medium. Enrichment of the DMEM with the above indicated factors strongly promoted the proliferation of the chicken SSCs. Moreover, this culture condition declined attachment and maintenance of the testicular somatic cells and thus they decreased gradually in the cultures. The enriched SSCs were positive for AP activity and with detectable levels of ASZ1, POU5F1, CVH and GPR125 gene expression. This study shows that serumfree medium supplemented with a combination of B27 and the above indicated growth factors induces proliferation and enrichment of chicken SSCs in vitro in a short period of time.