استخلاص و تنقية الانزيم Deoxyribonuclease I من البنكرياس البقري

ج ِم َعت عينات من البنكرياس البقري والغدة الزعترية للعجول من المجازر المحلية الستخالص االنزيم I Deoxyribonuclease) DNaseI ( والمادة االساس(DNA (على التوالي . وقد تم الحصول على المستخلص االنزيمي الخام باستخدام الماء المقطر المثلج و25.0 عياري من حامض الكبريتيك برقم ھيدروجيني 3 ولمدة 18 ساعة بدرجة حرارة 5 م بفعالية انزيمية 8500 وحدة/مللتر . ُح ِدَدت بعض العوامل المؤثرة في فعالية االنزيم الخام التي تضمنت استعمال 17 وحدة/مللتر من االنزيم و ساعة واحدة مدة تفاعل لالنزيم مع مادته االساس ُ َقي االنزيم باستخدام خطوات متتالية من الترسيب باستعمال كبريتات االمونيوم والتي اعطت عدد مرات تنقي . ن ً عند تركيز 7.2 وحدة / مللتر مقدارھا 4.529 بحصيلة انزيمية 35.6 .% اتصف االنزيم المنقى جزئيا بكونه فعاال ًعند رقم و50 مايكروغرام / مللترمن DNA الغدة الزعترية بعد 30 دقيقة من زمن التفاعل وامتلك االنزيم ثباتا ھيدروجيني 9 وكان الرقم الھيدروجيني االمثل لفعاليته 5.6 كما و َ أظھراالنزيم اعلى فعالية عند درجة حرارة ً في الفعالية االنزيمية ً كبيرا ً تحفيزيا 50 م . وكان اليونات المغنيسيوم والمنغنيز المضافة الى مزيج التفاعل تأثيرا ً في ً واضحا ً تثبيطيا ً، بينما كان اليونات الزئبقيك والفضة تأثيرا ً قليال ً تحفيزيا مع امتالك الكالسيوم والنحاسيك أثرا فعالية االنزيم . ثبطت فعالية االنزيم بوجود بعض العوامل المدنترة للبروتين والتي منھا Sodium) SDS( شـبه وبصورة) EDTA) Ethylene diamine tetra acetic acidَّبي sulphate dodecyl والعامل الكال كاملة عنـد معاملـته ببعـض العوامل المخـتزلة مثـل 2 -مركبتوايثانول واليوريا مع احتفاظ االنزيم بفعاليته عند . (PMSF) Phenyl methyl sulphonyl florideمادة وجود