تنقية وتوصيف انزيم بيتا – كالاكتوسيديز المنتج من عزلة محلية من العفن الآلف للحرارة العالية Rhizomucor pusillus IB8

نقي انزيم بيتا-كالاكتوسيديز الخارج خلوي والمنتج من العزلة المحلية للعفن Rhizomucor pusillus IB8 بعدة خطوات اشتملت على الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 80 % وكروماتوغ ا رفيا التبادل الايوني بعمود DEAE-Cellulose ومن ثم الترشيح الهلامي في عمود ، Sepharose CL– 6B وبلغ عدد مرات التنقية 42.2 مرة بحصيلة مقدارها 24.8 %. بينت نتائج توصيف الانزيم ان الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم تراوح بين 4.5 - 5 في حين كان الرقم الهيدروجيني الامثل لثبات الانزيم بين 5 - 5.5، ان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم هي 60 م. وتبين ان الانزيم ذو ثبات الحراري عال الى حد ما اذ احتفظ الانزيم بحوالي 98 % من فعاليته عند حضنة مدة 60 دقيقة في درجة حرارة 60 م في حين فقد حوالي 25 % عند حضنه مدة 120 دقيقة في درجة الحرارة نفسها . بلغت قيمة طاقة التنشيط لتحويل المادة الاساس ONPG الى ناتج 6.15 كيلو سعرة/مول بينما بلغت قيمة طاقة التنشيط لمسخ الانزيم 99.3 كيلو سعرة / مول . وبلغ الوزن الجزيئي للانزيم 232000 دالتون عند تقديرة بطريقة الترشيح الهلامي وكانت معدلات قيم ثابت ميكالس Km والسرعة القصوى Vmax للانزيم هي 0.46 ملي مولار و 223 مايكرومولار/دقيقة على الترتيب باستخدام ONPG بوصفها مادة اساس.