كلونينگ و بيان آنتي‌ژن LipL32 لپتوسپيرائي به عنوان كانديدي براي تشخيص سريع بيماري

زمينه و هدف: يكي از مشكلات اصلي در بيماري لپتوسپيروزيس، دشواري تشخيص آن است كه باعث شده اين بيماري به عنوان يك چالش در سلامت انسان و دام مطرح باشد. با توجه به مشكلات موجود در آزمون آگلوتيناسيون ميكروسكوپي (MAT) كه روش معمول در تشخيص اين عفونت است، تلاش‌هاي فراوني در جهت طراحي و اجراي روش‌هاي دقيق و سريع تشخيصي انجام شده است. با توجه به اين كه پروتئين غشاي خارجيLipL32 مي‌تواند به عنوان كانديد مناسبي براي مصارف تشخيصي محسوب شوند، در اين مطالعه قصد بر اين است كه اين آنتي‌ژن را كلون و بيان نماييم. مواد و روش‌ها: ابتدا ژن LipL32 بوسيله پرايمرهاي اختصاصي و روش PCR تكثير گرديد و سپس در داخل وكتور بياني pQE30 كلون گرديد و با استفاده از آزمون‌هاي كنترلي جهت قرار‌گيري قطعه مربوطه مورد تاييد قرار گرفت. براي بيان پروتئين مورد نظر، پلاسميد نوتركيب ايجاد شده در درون ميزبان مناسب (E.coli M15)، وارد و سپس بيان شد. نتايج: پروتئين بيان شده با استفاده از آزمون الكتروفورز SDS-PAGE مورد بررسي قرار گرفت و با تكنيك وسترن بلاتينگ و استفاده از آنتي‌بادي‌هاي اختصاصي، تائيد شد. نتيجه گيري: پروتئين نوتركيب LipL32 با موفقيت در سيستم پروكاريوتي بيان گرديد. اين پروتئين را مي‌توان در جهت طراحي روش‌هاي تشخيصي در عفونت‌هاي ناشي از لپتوسپيرا در دام يا انسان مورد استفاده قرار داد.