تشخيص كلبسيلا پنومونيه از طريق توالي اختصاصي 16SrDNA با استفاده از تكنيك PCR-ELISA

زمينه و هدف كلبسيلا پنومونيه از اعضاي خانواده ي انتروباكترياسه يكي از مهم ترين عامل هاي عفونت هاي بيمارستاني مي باشد كه بعد از Escherichia coli دومين عامل باكتريمي بيمارستاني ناشي از باكتري هاي گرم منفي است. در اين تحقيق هدف شناسايي اين باكتري از طريق ژن اختصاصي 16SrDNA با به كارگيري تكنيك PCR-ELISA مي باشد. مواد و روش ها در اين روش با استفاده از dNTP نشان دار شده با ديگوكسي ژنين براي تكثير ژن اختصاصي استفاده شد. كف پليت الايزا استرپتوآويدين بارگذاري كرده سپس با استفاده از پروب اختصاصي كه قسمت ابتداي آن بيوتينه شده بود جهت اتصال به ژن تكثير شده استفاده گرديد. بيوتين متصل به پروب به استرپتوآويدين متصل شده، همچنين ژن تكثير يافته نيز به پروب اختصاصي متصل شده در نهايت از آنتي بادي ضد ديگوكسي ژنين براي شناسايي محصول استفاده شد و واكنش با دستگاه نور سنج اندازه گيري شد. نتايج با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن 16SrDNA كلبسيلا پنومونيه تكثير شد كه نتيجه آن يك قطعه به طول bp 260 بود. نتايج حاصل از PCR-ELISA نشان داد كه اين تكنيك هيچ واكنش متقاطعي با با كتري هاي هم خانواده خود ندارد، همچنين ميزان حساسيت آن 6/0 نانوگرم ارزيابي شد. نتيجه گيري تكنيك PCR-ELISA روشي حساس و دقيق بوده كه براي شناسايي عوامل بيماري زا با استفاده از ژن اختصاصي آن باكتري به كار مي رود. اين تكنيك مي تواند جايگزين مناسبي براي تكنيك هاي زمان بر، با حساسيت كمتر و هزينه بيشتر، همچون روش هاي كشت باكتري در محيط هاي بلاد آگار و مك كانكي آگار، Realtime PCR ، تست هاي بيوشيميايي افتراقي كه امروزه در آزمايشگاه ها مورد استفاده قرار مي گيرد، باشد.