Appling real time RT-PCR for bluetongue virus detection in Iran

طي سال هاي 1388-1389 از روش real time RT-PCR و RT-PCRمعمولي جهت شناسايي ويروس زبان آبي در 310 گوسفند مشكوك به بيماري زبان آبي استفاده شد. قطعاتS1 (ژن پلي مراز) و S10 (ژن NS3 ) بعنوان ژنهاي حراست شده در گروه سرمي زبان آبي به ترتيب توسط rRT-PCRوRT-PCR معمولي مورد آزمايش قرار گرفتند و در نهايت تعداد 58 (18.6%) و 14 (4.5%) نمونه مثبت شناسايي شدند. جهت ارزيابي حساسيت rRT-PCR نسبت به RT-PCR معمولي از رقت هاي لگاريتمي RNA ويروس زبان آبي (BTV16) استفاده شد. نتايج حاكي از آن بود كه با روش RT-PCR عيار بيش از TCID50/ml 103.8 قابل شناسايي است، در حاليكه در روش rRT-PCR مرز تشخيص در حد TCID50/ml 101.8 از RNA ويروس در نمونه هاي باليني مي باشد. در اين مطالعه مشخص شد روش rRT-PCR از حساسيت فوق العاده ايي برخوردار است. دام‌هايي كه در انتهاي بيماري هستند و عيار ويروسي در خون آنها بسيار كاهش يافته است با اين روش قابل شناسايي مي‌باشند. دراين مطالعه سعي شد از برخي از نمونه هاي مثبت كه باروش rRT-PCR شناسايي شدند، جداسازي ويروس صورت گيرد. براي اين منظور از روش تزريق به عروق كوريوآلانتوييد تخم مرغ جنين دار و كشت سلول Vero و KC استفاده شد. عليرغم تلاش هاي صورت گرفته جداسازي ويروس امكان پذير نشد.

During 2009-10, real time RT-PCR and conventional RT-PCR techniques Used for detecting BTVs RNA in 310 blood samples. For real time and gel based RT-PCR segment-1 and segment-10 selected as conserve genes to search any BTV strains. Using these methods, 58 (%18.7) and 14 (%4.5) positive samples were detected among the clinically suspected sheep. Sensitivity of both molecular techniques evaluated by log-10 serial dilutions of BTV16 RNA, and determined 101.8 and 103.8 TCID50/ml in rRT-PCR and conventional RT-PCR respectively. This report confirmed rRT-PCR assay could detect weak BTV positive samples even at end stage of infection. In this study Virus isolation from selected positive samples failed by inoculation to embryonated chicken egg, Vero and KC cell.