Application of culture and polymerase chain reaction (PCR) methods for isolation and identification of Mycoplasma synoviae on broiler chicken farms

مايكوپلاسما سينوويه يكي از با اهميت‌ترين عوامل بيماري‌زاي پرندگان در سرتاسر جهان مي‌باشد كه موجب خسارات اقتصادي جدي در صنعت پرورش طيور از طريق ايجاد عفونتهاي مجاري تنفسي و سينوويت عفوني و ايجاد زمينه براي بروز عفونت توسط ديگر ميكروارگانيسم‌ها مي‌گردد. اين مطالعه جهت جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما سينوويه با بكارگيري روشهاي كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز از مزارع پرورش مرغ گوشتي استانهاي تهران، قزوين و مركزي كه در پرورش طيور گوشتي از اهميت ويژه‌اي برخوردارند، انجام گرفت. 43 نمونه سوآپ كامي ـ حلقي، ناي و كيسه هاي هوايي، به صورت همزمان مورد كشت (در محيط‌هاي اختصاصي PPLO ) و آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز قرار گرفتند. استخراج DNA باكتريها به روش فنل-كلروفرم انجام گرفت و آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز بر روي نمونه هاي استخراجي با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي در ناحيه ژن 16S rRNA با محصولاتي به طول bp 163 براي جنس مايكوپلاسما و bp 207 براي گونه مايكوپلاسما سينوويه انجام شد. از 43 نمونه سواپ، 28 نمونه داراي پرگنه در محيط كشت و 33 نمونه نيز در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز مثبت گزارش شدند، در حاليكه 6 نمونه داراي نتيجه كشت منفي، واكنش زنجيره‌اي پليمراز مثبت و تنها يك نمونه كشت مثبت، واكنش زنجيره‌اي پليمراز منفي گزارش شد. 24 نمونه از سوآپ ها نيز در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز گونه مايكوپلاسما سينوويه مثبت تشخيص داده شدند كه همگي آنها در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز جنس مايكوپلاسما مثبت گزارش شده بودند. در اين مطالعه آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز آلودگي به مايكوپلاسما را به ميزان بيشتري نسبت به كشت رديابي كرد و از طرف ديگر آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز نسبت به كشت، بسيار سريعتر و ارزانتر بود، لذا مي‌توان نتيجه‌‌گيري كرد كه آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز مي‌تواند به عنوان روش جايگزين براي كشت، با توانايي بسيار بالا در ارايه آمار واقعي آلودگي مزارع مرغ گوشتي به مايكوپلاسما سينوويه توصيه گردد.

Mycoplasma synoviae (M. synoviae) is a major worldwide poultry pathogen that causes serious economic losses in the poultry industry. This study was designed to detect M. synoviae through culture isolation and polymerase chain reaction (PCR) assay to demonstrated the involvement of M. synoviae infection in trachea and the lung/air sac samples taken from commercial broiler chicken farms in 3 main provinces of Iran (Tehran, Markazi and Qazvin), with clinical signs of the disease. Total of 43 samples were cultured in PPLO broth media supplemented for M. synoviae isolation. The bacteria DNAs were extracted by phenol/chloroform method and the PCR assay amplifying the conserved region of 16S rRNA gene was applied for the detection of Mycoplasma genus in 163bp fragment and M. synoviae in 207bp fragment from culture as same as in clinical samples. Of the 43 swabs 28(65.1%) yielded one of the potentially pathogenic mycoplasmas evaluated for using PPLO agar culture diagnostic method, and 33(76.8%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using Mycoplasma genus PCR as diagnostic method, and 24(55.9%) of the swabs yielded M. synoviae for using M. synoviae PCR as diagnostic method. In this study we had observed the highest quantity of M. synoviae infections in broiler chicken with PCR test. In conclusion, PCR is a more rapid, effective, sensitive and inexpensive method than the standard culture technique, that could be used as an alternative method for traditional culture and showed the real number of the M. synoviae contaminated broiler chicken farms.