OPTIMIZATION OF LIPASE IMMOBILIZATION

چكيده در اين پروژه، سودوموناس آيروژينوزا BBRC-10036 براي توليد ليپاز مورد استفاده قرار گرفت. اين سويه ي ميكروبي ليپاز خارج سلولي را توليد مي نمايد. روش هاي متفاوتي جهت خالص سازي وجود دارد كه در اين تحقيق ابتدا از روش راسب سازي استفاده شد تا شرايط بهينه ي ترسيب مشخص شود و سپس با استفاده از كروماتوگرافي تبادلگر يوني، خالص سازي انجام شد. درصد بازيافت آنزيم پس از استفاده از اين ستون تبادل گر يوني، 47/11% به دست آمد و آنزيم به ميزان 3/2 برابر خالص شد. سپس ليپاز به دست آمده از سودوموناس آيروژينوزا در دانه هاي آلژينات كلسيم تثبيت شد و تاثير پارامتر هاي مستقل مانند غلظت آلژينات سديم، كلريد كلسيم و آنزيم بر روي درصد تثبيت و ميزان فعاليت آنزيم تثبيت شده، بررسي شد. بهينه سازي شرايط براي تثبيت ليپاز توسط روش پاسخ سطح انجام شد. با توجه به نتايج، شرايط بهينه ي تثبيت در 5/2 درصد وزني آلژينات سديم ، كلريد كلسيم 5/2 مولار و 50 درصد حجمي آنزيم، اتفاق افتاد. كه تحت شرايط مذكور، مقدار بهينه براي درصد تثبيت 65/93% و براي ميزان فعاليت باقيمانده 64/2 واحد بر گرم آنزيم تثبيت شده به دست آمد.

Abstract Pseudomonas aeruginosa BBRC-10036 was used for lipase production. The organism secreted the enzyme extracellulary. In order to purify the enzyme, precipitation was carried out first, and then this lipase was purified by Ion Exchange Chromatography leading to 2.3-fold purification and 11.47% recovery. Lipase from P.aeruginosa was entrapped into Ca-alginate gel beads and effect of independent variables such as alginate concentration (%w/v), CaCl2 concentration (M) and enzyme load (%v/v) on immobilization yield and activity of immobilized enzyme were investigated. Media optimization for immobilization of lipase was carried out by Response Surface Methodology. The optimum conditions were: sodium alginate concentration 2.5% (w/v), calcium chloride concentration 2.5(M) and enzyme load 50% (v/v). Under these conditions, the highest immobilization yield and the optimum activity of immobilized enzyme obtained were 93.65% and 2.64 unit/gr(IME), respectively.