Purification and characterization of a thermostable neutrophilic metalloprotease from Pseudomonas sp. DR.89

يك متالوپروتياز نوتروفيل از باكتري بنام سودوموناس سويه DR.89 موجود در يك چشمه آب معدني در ايران، جداسازي شد. باكمك يك روش سه مرحله‏اي شامل: رسوب دهي با سولفات آمونيوم و كروماتوگرافي هاي تبادل يونيQ- سفاروز و غربال مولكولي سفادكس G-100 ، از اين سويه، يك آنزيم پروتياز، به ميزان 13 مرتبه خالص سازي گرديد. نتايج نشان داد كه آنزيم در محدوده وسيعي از pH بين 5-10 مخصوصاً 8 pH فعال است. آناليز هاي زيموگرام و الكتروفورز ژل سديم دودسيل سولفات پلي آكريل آميد(SDS-PAGE)، حضور يك پروتياز با وزن مولكولي 74 كيلودالتون را نشان داد. فعاليت آنزيم در حضور Zn2+، Mn2+، H2O2 و سيتيل تري متيل آمونيوم برومايد(CTAB)، كاهش نشان داد. درحالي در حضور تركيبات Ca2+، Mg2+، Cu2+ و دي متيل سولفوكسيد(DMSO) فعاليت آنزيم افزايش نشان داد. تركيباتNa+، فنيل متيل سولفونيل فلوريد (PMSF)، بتا- مركاپتواتانول، سديم دودسيل سولفات(SDS) و تريتونX-100 اثر قابل توجهي بر فعاليت آنزيم نشان ندادند. كازيين نسبت به آلبومين سرم گاوي(BSA) و ژلاتين، سوبستراي بهتري براي فعاليت آنزيم بود. همچنين، پارامترهاي سنتيكي (Km و Vmax) آنزيم نسبت كازيين سنجيده شد. با اين خواص، پشنهاد مي شود احتمالاً بتوان از اين آنزيم در صنايع غذايي استفاده كرد

A novel neutrophilic metalloprotease was isolated from Pseudomonas sp. DR89 isolate which was identified in a mineral spring in Iran. The enzyme was purified from the isolate to 21-folds in a three-step procedure involving ammonium sulfate precipitation, Q-Sepharose ionic exchange and Sephadex G-100 gel filtration chromatography. Resuts showed that the enzyme was active at high temperatures and in a wide-range pH of 5-11 with the optimum of 8.0. The zymogram and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis analysis revealed the presence of one protease with a molecular weight of 74 kDa. The enzyme activity was decreased by Zn2+, Mn2+, H2O2 and cetyl trimethylammonium bromide (CTAB), whereas its activity was increased by Ca2+, Mg2+, Cu2+ and dimethyl sulfoxide (DMSO). Na+, phenylmethyl sulfonylfluoride (PMSF), b-mercaptoethanol, sodium dodecyl sulfate (SDS), and Triton X-100 did not show a considerable effect on its activity. Casein was a better substrate than bovin serum albumin (BSA) and gelatin for this enzyme. The kinetic parameters (Km and Vmax) of the purified protease towards caseinolytic activity were also determined. These properties of the enzyme make it suitable for use in food industries