Development and ELISA-based detection of anti-M2e IgY antibodies using an encoding plasmid for M2e-Hsp70 C-terminal gene

زمينه مطالعه: استفاده از آنتي بادي هاي زرده ‌(IgY)‌ به جهت كاربردهاي متنوع تشخيصي، درماني و همچنين تحقيقاتي و بيوتكنولوژي مورد توجه روز افزون قرار گرفته است. هدف:‌ ‌در اين مطالعه توليد آنتي بادي ضد پپتيد e2M ‌ آنفلوانزاي طيور در زرده تخم‌مرغ بررسي گرديد. روش كار:‌ ‌پلاسميد حاوي قطعه كد كننده e2M و بخش انتهايي كربوكسيل پروتيين شوك حرارتي70 به عضله سينه مرغ‌هاي تخم گذار تزريق شد. سرم و زرده تخم مرغ از نظر وجود آنتي بادي‌هاي ضد e2M توسط آزمون الايزاي غير مستقيم مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج: حضور آنتي بادي‌هاي ضد e2M در نمونه هاي زرده و سرم مرغ ها به ترتيب از روز 13 و 7 بعد از تزريق مورد سنجش قرار گرفتند و بيشترين مقدار آنتي بادي به ترتيب در روزهاي 41 و 35 مشاهده شد. نتيجه گيري نهايي: توليد آنتي بادي هاي ضد e2M در مرغ‌هاي تخم‌گذار امكان استفاده از ساختار پلاسميدي e-HspC-terminal2M جهت ايمن سازي رانشان مي‌دهد و ابزار مناسبي براي تهيه آنتي بادي هاي پلي كلنال و اختصاصي بر عليه اين آنتي ژن است. اين آنتي بادي‌ها براي اهداف تشخيصي و درماني آنفولانزا كار برد دارند.‌

Background: The use of IgYs in a variety of methods in different areas of research, diagnostics, medical application and biotechnology should be considered widely. Objectives: Development of antibodies against extra cellular domain of influenza M2 (M2e) protein in egg yolk of laying hens. Methods: A Fusion construct harboring C-terminal of bovine heat shock protein 70 (Hsp70) and influenza M2e coding genes was injected to laying hens. Serum and egg yolk antibodies were screened for the presence of anti-M2e antibodies by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: Anti-M2e antibodies were detected in egg yolks and sera of injected hens from 13 and 7 days post injection (PI), with the peak titer detected on 41 and 35 days PI, respectively. Conclusions: Anti-M2e IgY titers could be an index for expression potential of pcDNA3.1-M2e-HspC-terminal construct in laying hens. This construct could be considered as a promising tool in production of anti-M2e polyclonal, monospecific IgY antibodies. Such anti-M2e antibodies could be exploited for influenza diagnostic and therapeutic measures.