Molecular differentiation of sheep and cattle isolates of Fasciola hepatica using RAPD-PCR

درك ساختار ژنتيكي و تنوع ژنتيكي فاسيولاهپاتيكاي جدا شده از ميزبان هاي مختلف، پيچيدگي‌هاي همه گيري شناسي و مهمي دارد كه در كنترل فاسيولوزيس موثر هستند. از روش RAPD-PCR جهت مطالعه تنوع ژنتيكي فاسيولاهپاتيكا در گوسفند و گاو بكار گرفته ‌شد. DNA از كرم هاي بالغ فاسيولا جمع‌آوري ‌شده كه از كبد حيوانات آلوده در كشتارگاه استان آذربايجانشرقي در شمالغرب ايران استخراج گرديد. سپس با استفاده ازسه عدد پرايمر اوليگونوكليوتيد دكامري همراه با توالي‌هاي DNA خالص به وسيله واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز تكثير شدند .الگوهاي RAPD بصورت اختصاصي اما براي هر قطعه DNA در هر پرايمر متفاوت بودند. شباهت داخل گونه‌اي براي دو ايزوله فاسيولاهپاتيكا در محدوده 69 تا 100درصد قرار داشت. يافته‌ها نشان داد كه فاصله ژنتيكي بين گونه‌اي بيشتر از فاصله ژنتيكي داخل گونه‌اي است (47-19 درصد در مقايسه با 19-0 درصد). درخت تبار‌زايشي پيشنهادي درباره اين ايزوله‌ها نشان داد كه تنوع ژنتيكي در تحت ساختارهاي جمعيتي فاسيولاهپاتيكاي انگل گوسفند و گاو در ايران، سوالات بحث برانگيزي درباره اختصاصات ميزبان، اپيدميولوژي (از قبيل ، انتقال زيونوتيك) و اكولوژي را بدنبال دارد. علاوه براين روش RAPD-PCR در تشخيص انفرادي و بررسيهاي اپيدميولوژيكي در مناطق آندميك مفيد است.

Understanding genetic structure and status of genetic variation of Fasciola hepatica isolates from different hosts, has important implications on epidemiology and effective control of fasciolosis. Random amplified polymorphic DNA (RAPD-PCR) was used to study the genetic variation of F. hepatica in sheep and cattle. DNA was extracted from adult helminthes removed from livers of each infected animal in slaughterhouse at East-Azerbaijan province, North-West of Iran. DNA template amplified by the polymerase chain reaction, using three oligonucleotide decamers with arbitrary DNA sequences as primers. RAPD patterns showed the specific but different pattern DNA patterns for each primer. The intraspecific similarity coefficient within two isolates of F. hepatica was ranged between 69 to 100%. Present findings showed that the interspecific genetic distance was higher than intraspecific genetic distances (19-47% compares to 0-19%). Pair wise similarity matrices generated from each isolates-primer combination were totaled and the similarity coefficient between strains were calculated both manually (Nei and Li method) and software analysis (Free-Tree-Freeware program). The inferred phylogenetic tree on the fingerprinting of these isolates clearly demonstrated the existence of population genetic diversity sub structuring within F. hepatica of sheep and cattle of Iran, raising interesting questions on the host specificity, epidemiology (e.g., zoonotic transmission) and ecology of this fluke. RAPD-PCR is useful for both individual identification and epidemiological investigations in endemic regions.