Isolation and identification of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction (PCR) from sheepof Qom province, Iran

آگالاكسي يكي از سندروم هاي عفوني در گوسفند مي‌باشد كه دام‌هاي مبتلا معمولا" دچار تورم پستان، كاهش توليد شير، آرتريت، سقط جنين و التهاب ملتحمه چشم مي‌شوند. مايكوپلاسما آگالاكتيه عامل اصلي اين بيماري در گوسفندان محسوب مي‌شود. هدف از انجام اين مطالعه جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما آگالاكتيه ازگوسفندان استان قم با استفاده از روش‌هاي كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز بود. در اين مطالعه در مجموع 102 نمونه ( شير، سواپ چشم، سواپ گوش و مايع مفصلي) ازگوسفندان مشكوك به آگالاكسي اخذ شد و در آزمايشگاه رفرانس مايكوپلاسما موسسه رازي به صورت همزمان در محيط‌هاي اختصاصي PPLO مورد كشت و آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز قرار گرفتند. استخراج DNA به روش فنل-كلروفرم انجام گرفت و آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز بر روي نمونه‌هاي استخراجي با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي با محصولاتي به طول 163جفت باز در ناحيه ژن 16S rRNA براي جنس مايكوپلاسما و 375 جفت باز در ناحيه ژن ليپوپروتيين سطحي براي گونه مايكوپلاسما آگالاكتيه انجام شد. از 102 نمونه، 19 نمونه داراي پرگنه اختصاصي در محيط كشت PPLO آگار بوده و به عنوان مايكوپلاسما مورد شناسايي قرار گرفتند و 59 نمونه نيز در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز جنس مايكوپلاسما مثبت بودند. 19 نمونه نيز در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز گونه مايكوپلاسما آگالاكتيه مثبت تشخيص داده شدند كه همگي آنها در آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز جنس مايكوپلاسما مثبت بودند. از 102 نمونه 19 نمونه كشت مثبت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز مثبت، 42 نمونه كشت منفي و واكنش زنجيره‌اي پليمراز منفي بودند در حاليكه 40 نمونه كشت منفي و واكنش زنجيره‌اي پليمراز مثبت و تنها 1 نمونه كشت مثبت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز منفي بود. دراين مطالعه بيشترين موارد جداسازي مايكوپلاسما آگالاكتيه از نمونه‌هاي شير و كمترين موارد از مايع مفصلي بودند. همچنين اين مطالعه جداسازي مايكوپلاسما آگالاكتيه را براي اولين بار از گوسفندان استان قم گزارش مي‌كند و نشان مي‌دهد كه مايكوپلاسما آگالاكتيه يكي از عوامل اصلي آگالاكسي در گوسفندان استان قم مي‌باشد.

Contagious agalactia (C.A) is an infectious syndrome of sheep that is characterized by mastitis and subsequent failure of milk production, arthritis, abortion and keratoconjunctivitis. Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae) is the main cause of the disease in sheep. The aim of this study was isolation and identification of M. agalactiae with culture and polymerase chain reaction (PCR) assay from sheep of Qom province in Iran. A total of 102 samples were collected from milk secretion, eye, ear and joint exudates of sheep. All samples were cultured in PPLO broth supplemented for M. agalaciae isolation. The bacteria DNAs were extracted by phenol/chloroform method and the PCR assay was applied for detecting of Mycoplasma genus in 163bp fragment of 16S rRNA gene and M. agalactiae in 375bp fragment of lipoprotein gene from culture as same as in clinical samples. Out of the 102 samples, 19(18.63%) cultures were shown positive and typical Mycoplasma colonies in PPLO agar culture diagnostic method and 59(57.8%) were scored positive by Mycoplasma genus PCR, 19(18.62%) of the samples were scored positive by using M. agalactiae PCR as diagnostic method. Out of the 102 samples, 19 samples were shown both positive in the culture and PCR, 42 samples were shown both negative in the culture and PCR. 40 samples were negative in the culture and positive in PCR whereas only one sample was positive in culture and negative in PCR. The results showed that the more isolations of M. agalactiae were taken from milk and less in joint samples. M. agalactiae was one of the main factors of contagious agalactia that was detected for the first time from sheep in Qom province.