Abstract :
Six Bradyrhizobium (lupin) strains were evaluated for their ability to produce in vitro siderophores using four chemical assays. Bradyrhizobium strains WPBS 3201 D and 3211 D gave positive reactions with the chrome azurol S assay (CAS) and produced hydroxamate-type siderophores. The other four strains (USDA 3040, 3041, 3042 and CB 2272) gave negative results for siderophore production with the four assays. The generation time, growth yield and hydroxamate production of strain WPBS 3201 D were affected by the iron concentration of the culture medium and the previous culture history of the cells. Resuspension of washed cells grown previously in media supplemented with 0 and 20 μmol•L−1 Fe into differing iron regimes (0 and 20 μmol•L−1 Fe) suggest that the extent of hydroxamate production was dependent on the growth history of the cells. Cells pre-grown in 20 μmol•L Fe produced a high amount of hydroxamates compared with cells pre-grown in iron-free medium when resuspended in medium containing up 4 μmol•L−1 Fe. Cells pre-grown in 20 μmol•L−1 Fe were also more sensitive to iron repression than those pre-grown in 0.5 μmol•L Fe. Mannitol was the best carbon source for siderophore production. Siderophore synthesis was inhibited by 4-chloromercuribenzenesulfonic acid, 2,4-dinitrophenol, sodium azide and MgCl2 suggesting that an energized membrane and a mercapto group are essential and required for hydroxamate synthesis in Bradyrhizobium (lupin) strain WPBS 3201 D.
Résumé
Six souches de Bradyrhizobium (lupin) ont été évaluées pour leur capacité à produire, in vitro, des siderophores par des tests chimiques. Les souches WPBS 3201 D et WPBS 3211 D ont donné une réaction positive avec le CAS (chrome azurol S) et produisent des siderophores de type hydroxamate. Les quatre autres souches (USDA 3040, 3041, 3042 et CB 2272) ont donné en revanche des résultats négatifs quant à la production de siderophores. Le temps de génération, le rendement de croissance et la production dʹhydroxamate de la souche WPBS 3201 D étaient affectés par la concentration en Fe dans le milieu de culture et par lʹhistoire de la culture. La production dʹhydroxamate était dépendante de lʹhistoire des cellules en culture et notamment des conditions en concentrations de Fe (0 et 20 μmol•L−1) dans lesquelles elles avaient poussé. Les cellules ayant préalablement poussé avec 20 μmol•L−1 de Fe produisent une quantité importante dʹhydroxamate, contrairement aux cellules ayant poussé dans un milieu sans fer, lorsquʹelles sont reprises dans un milieu contenant jusquʹà 4 μmol•L−1 de fer. Elles étaient également plus sensibles à la répression par le fer que celles ayant poussé avec 5 μmolL−1. On a montré que le mannitol est la meilleure source de carbone pour la production de sidérophores. Enfin la synthèse de sidérophores est inhibé par lʹacide 4-chloromercuribenzène sulfonique, le 2,4-dinitrophénol et le MgCl2, suggérant fortement quʹune énergie membranaire et un groupe mercapto sont essentiels pour la synthèse dʹhydroxamate chez les Bradyrhizobium (lupin) WPBS 3201 D.
Résumé
Six souches de Bradyrhizobium (lupin) ont été évaluées pour leur capacité à produire, in vitro, des siderophores par des tests chimiques. Les souches WPBS 3201 D et WPBS 3211 D ont donné une réaction positive avec le CAS (chrome azurol S) et produisent des siderophores de type hydroxamate. Les quatre autres souches (USDA 3040, 3041, 3042 et CB 2272) ont donné en revanche des résultats négatifs quant à la production de siderophores. Le temps de génération, le rendement de croissance et la production dʹhydroxamate de la souche WPBS 3201 D étaient affectés par la concentration en Fe dans le milieu de culture et par lʹhistoire de la culture. La production dʹhydroxamate était dépendante de lʹhistoire des cellules en culture et notamment des conditions en concentrations de Fe (0 et 20 μmol•L−1) dans lesquelles elles avaient poussé. Les cellules ayant préalablement poussé avec 20 μmol•L−1 de Fe produisent une quantité importante dʹhydroxamate, contrairement aux cellules ayant poussé dans un milieu sans fer, lorsquʹelles sont reprises dans un milieu contenant jusquʹà 4 μmol•L−1 de fer. Elles étaient également plus sensibles à la répression par le fer que celles ayant poussé avec 5 μmolL−1. On a montré que le mannitol est la meilleure source de carbone pour la production de sidérophores. Enfin la synthèse de sidérophores est inhibé par lʹacide 4-chloromercuribenzène sulfonique, le 2,4-dinitrophénol et le MgCl2, suggérant fortement quʹune énergie membranaire et un groupe mercapto sont essentiels pour la synthèse dʹhydroxamate chez les Bradyrhizobium (lupin) WPBS 3201 D.
