1192

معرفي پروتئين هاي سرم خون ماهي قزل آلا (Oncorhynchus mykiss) و آمور (Ctenophaeyngodon idella) و تعيين ايمنو گلوبولينهاي آنها به طريق ايمنوالكتروفورز

غرقي احمد

لطيفي نژاد، حسين ، همكارطرح

1392

وزارت ﺟﻬﺎد ﮐﺸﺎورزي - ﺳﺎزﻣﺎن ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت، آﻣﻮزش و ﺗﺮوﯾﺞﮐﺸﺎورزي - ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر

اندازه‌گيري پروتئين‌هاي سرم ماهيان جهت بررسي شرايط فيزيولوژيك و هنگام آلودگي آنها با اجرام بيماريزاي احتمالي اهميت بسيار زيادي دارد. در اين پروژه پروتئينها و ايمنوگلوبولينهاي ماهيان قزل‌آلا و آمور در شرايط آب و هوايي ايران مورد بررسي قرار گرفته است. براي جداسازي پروتئينهاي سرم و اندازه‌گيري مقادير آنها از روش الكتروفورزيس با استفاده از ژل آكاروز كيت هيدر اژل پروتئين ساخت شركت سبيا فرانسه و براي تعيين مقدار پروتئين تام سرم از دستگاه اتو آنالايزر هيتاچي 704 استفاده گرديد. تعداد 220 قطعه ماهي قزل‌آلا از دو ناحيه متفاوت پرورش ماهيان سرد آبي در سنين بين 16-7 ماهگي و تعداد 110 قطعه ماهي آمور نيز از دو ناحيه متفاوت در استان مازندران در سنين بين12-8 ماهگي نمونه‌برداري شدند. خونگيري از وريد دمي نزديك باله مخرجي انجام شد و پس از تهيه سرم خون نسبت به انجام آزمايشها اقدام گرديد در اين آزمايشها مقادير پروتئين‌هاي سرم خون مانند آلبومين و گلوبولينها اندازه‌گيري شدند. در اين پروژه با تزريق سرم ماهي به همراه اوجوانت كامل و ناقص فروندز و بر اساس برنامه خاص آنتي سرم پلي والان ضد سرم ماهي تهيه گرديد كه در بررسي‌هاي ايمنوالكتروفورتيك سرم ماهيان مورد استفاده قرار گرفت. همچنين به علت عدم دسترسي به آنتي ايمنوگلوبولين ماهيان ياد شده جهت تعيين محل الكتروفورتيك آنها سعي گرديد تا با استفاده از روش رسوب ايمنوگلوبولين با نمك (سولفات آمونيم) ايمنوگلوبولين ماهيان مذكور تقريباً تخليص و محل الكتروفورتيك آنها از طريق الكتروفرزيس و ايمنوالكتروفرزيس تعيين گردد. ميزان طبيعي پروتئين تام پلاسما در آبزيان 50-30 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر و مقدار ايمنوگلوبولين طبيعي آنها بين 7-3 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر گزارش شده است (18). نتايج حاصل از آزمايش‌هاي سرولوژيك و الكتروفورز سرم ماهيان قزل‌آلا و آمور در سنين مختلف رشد مطابق نماي شماره يك مي‌باشد. جدول شماره 1 : ميانگين مقادير پروتئينها و ايمنوگلوبين سرم خون ماهيان قزل‌آلا و آمور آمور قزل‌آلامقدار پروتئين mg/ml 19mg/ml 5/38پروتئين تام mg/ml 5mg/ml 12آلبومين mg/ml 5/6mg/ml 3/17 mg/ml 4mg/ml 4/4 mg/ml 46/3mg/ml 91/4ايمنوگلوبين

The concentration of serum immunoglobulin in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and(Ctenopharyngodon idella)was measured by Immunoelectrophoresis. Serum total protein, also called plasma total protein or total protein, is a biochemical test for measuring the total amount of protein in blood plasma or serum. Protein in the plasma is made up of albumin and globulin. The globulin in turn is made up of α1, α2, β, and γ globulins. These fractions can be quantities using protein electrophoresis, but the total protein test is a faster and cheaper test that estimates the total of all fractions together. The traditional method for measuring total protein uses the biuret reagent, but other chemical methods such as Kjeldahl method, dye-binding and Refractometer are now available. The measurement is usually performed on automated analyzer salong with other laboratory tests. The normal IgM concentration was 3.3 mg ml in a group of free-living trout. While the IgM concentration was low in sera from fish living under aquarium conations. In visual variations were very pronounced. The purity of reference preparations and the specificity of anti sera used were examined by crossed Immunoelectrophoresis. Fish respond to antigenic stimulation by the production of immunoglobulin. So far only one immunoglobulin class is known to occur in teleosts, the characteristics of the class being rather similar to those of mammalian IgM. The molecule is a tetramers consisting of a basic structure of 8 light chains and 8 heavy chains (same molecular weight as the p-chains of mammals) (Acton et al. 1971, Etuis 1982). The molecular weight of the whole molecule is about 700 000 Daltons (13 to 16 S). Most studies concerning the humoral immune response in teleosts have dealt with aracteristics of the immune response elicited by known antigens. Only in a few cases has the concentration of total immunoglobulin been measured. Estimates of total immunoglobulin have been made in serum from (Oncorhynchus mykiss) and (Ctenopharyngodon idella) carp and goldfish (Vilain et al. 1984), carp (Richter et al. 1973), brown trout (Ingram & Alexander 1979) and certain salt-water fish (Fidler et al. 1969, Acton et al. 1971, Legler et al. 1971). Estimates of total IgM in serum from rainbow trout Salmo gairdnen have not, to our knowledge, been published so far.Serum. Blood samples were obtained by puncture of the caudal vein of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and(Ctenopharyngodon idella)After clotting overnight at 4 C the blood was centrifuged at 1000 g for 15 min to obtain serum. The sera were stored at -20 C until examined. Total serum protein. Protein concentration in (Oncorhynchus mykiss) and(Ctenopharyngodon idella) sera was estimated by means of the Biuret method(Richtenich 1971). Antiserum to IgM : The monospecificity of the rabbit antiserum to rainbow trout IgM was indicated by the appearance of only one precipitation Line when the antiserum was reacted against normal trout serum in crossed Immunoelectrophoresis (Fig. 1). The purity of the IgM preparation which was used as reference IgM in connection with IgM quantification is illustrated in Fig. 2a. It appears that only one precipitation line developed when the preparation was reacted against antiserum to trout serum in crossed Immunoelectrophoresis. Fig. 2b illustrates the multi specificity of the rabbit antiserum to trout serum used.

ايمنوالكتروفورز , معرفي پروتئين هاي سرم خون ماهي قزل آلا (Oncorhynchus mykiss) , آمور (Ctenophaeyngodon idella)

تهران موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور

جدول، رنگي، مصور

موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 42713

كتابنامه: ص. 43- 44

قرل آلا , ماهي پرورشي , خون- پروتئين ها

3757

م 23 غ

639