1308

كشت اوليه بافت هاي باله تاسماهي ايراني و ذخيره سازي سلول هاي كشت يافته جهت تهيه تيره هاي سلولي (Cell line) و شناسايي سلول هاي بنيادي در آينده

نوروزفشخامي، محمدرضا

پوركاظمي، محمد ، همكارطرح , حسن زاده صابر، محمد ، همكارطرح , برادران نويري، شهروز ، همكارطرح , غرقي، احمد ، همكارطرح , دليري، مرتضي ، همكارطرح

1395

سازمان تحقيقات، آموزش و ترويج كشاورزي - موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور

در اين تحقيق روش كشت بافت باله دمي تاسماهي ايراني Acipenser persicus با استفاده از كشت تكه هاي بافتي بدست آمد. بدين منظور حاشيه باله دمي ماهيان 3-2 ساله را به اندازه تقريبي 2 سانتيمتر با رعايت شرايط استريل بريده،سه بار با محيط كشتL-15 داراي آنتي بيوتيك ها و ضد قارچ شستشو داده، سپس به تكه هاي 1 ميليمتري بريده و درمحيط كشتL-15 حاوي HEPES (mM 25)، آنتي بيوتيك ها، ضد قارچ و 20 درصد سرم جنين گاو (FBS) درانكوباتور 22 درجه سانتيگراد كشت داده شد. پس از تشكيل مقدار كافي لايه سلولي روي كف فلاسك، سلول ها باPBS حاوي آنتي بيوتيك ها شستشو داده شدند و توسط محلولTrypsin-EDTA (25/0 درصد) و تكان دادن فلاسك از كف فلاسك جدا شدند. پس از افزودن FBS و شستشوي سلول ها با محلول PBS حاوي آنتي بيوتيك ها وضد قارچ، سلول ها به يك فلاسك جديد حاوي 5 ميلي ليتر محيط كشت L-15، 20 درصد FBS، آنتي بيوتيك هامنتقل و در انكوباتور22 درجه سانتيگراد قرار داده شد (ساب كالچر اول). پس از گذشت 48 ساعت، چسبيدن تقريباً 75% سلول ها به كف فلاسك و تكثير آنها مشاهده شد. پس از تشكيل يك لايه سلولي، سلول ها دوباره كشت داده شدند (ساب كالچر دوم). در اين تحقيق از محيط كشت هايM199 ،DMEM/F12 ،10 و 15 درصد سرم جنين گاو و دماهاي20 و 25 درجه سانتگيراد نيز استفاده شد. تكه هاي بافت تغذيه شده با محيط كشت L-15رشد خوبي را نشان دادند ولي در ساير محيط كشت ها رشد نيافتند. بيشترين تكثير سلولي در محيط كشت L-15 داراي 20 درصد سرمجنين گاو و دماي 22 درجه سانتيگراد اتفاق افتاد. در بين سلول هاي حاصل از كشت اوليه، سلول هاي شبه فيبروبلاست و شبه اپي تليال مشاهده شد و در سلول هاي حاصل

: In this study caudal fin tissue culture method of Persian sturgeon, Acipenser persicus was obtained from the explants culture of this fin. For this purpose the margin of tail fin from 2-3 years old specimens was aseptically cut (2cm), washed three times with L-15 medium containing antibiotics and antimycotic, and then minced into 1 mm explants and cultured in L-15 medium complemented with HEPES, antibiotics, antimycotic and FBS (20%) at 22°C. After confluent monolayer formation on the bottom of the flask, the cells were washed with PBS containing antibiotics and antimycotic and dislodged by trypsin-EDTA solution (0.25%), by shaking the flask.After adding FBS and washing the cells with PBS containing the antibiotics and antimycotic, cellswere transferred to a new flask containing 5 ml L-15 medium, FBS (20%), antibiotics, antimycotic and incubated at 22°C (subculture1). Within 48 hours, attachment of nearly 75% of cells and their prolifteration was visible. After confluent monolayer formation, cell was subcultured(subculture2).In this study M 199 and DMEM/F12 media, 10% and 15% FBS, temperatures 20°C and 25°C were examined too. Explants fed with L-15 showed good cell growth but no growth was observed in the other media. Most proliferation of cells was visible when the L-15 medium was supplemented with 20% FBS and 22°C. The emerging cells from explants exhibited fibroblast-like and epithelial-like cells in primary culture and the fibroblast-like cells were seen to predominate after the first passage.Keywords: Caspian Sea, Persian sturgeon, Acipenser persicus, Tissue culture, Caudal fin

درياي خزر , تاسماهي ايراني , Acipenser persicus , كشت بافت , باله دمي

تهران موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور

رنگي، مصور

موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 50017

كتابنامه: ص. 31-33

تاس ماهيان- بافت ‌شناسي

42

ك748ن

597