عنوان :
بررسي علل احتمالي ويروسي تلفات ماهيان كپور نقرهاي و آمور پرورشي در استان گيلان
شرح پديد آور/مجري (مجريان) طرح :
قاسمي، محدث
شناسه هاي افزوده :
شريف پور، عيسي ، همكارطرح , ذريه زهرا، جليل ، همكارطرح , شريف روحاني، مصطفي ، همكارطرح , كاكولكي، شاپور ، همكارطرح , مرادي،مهدي ، همكارطرح , بهمنش، شهرام ، همكارطرح , دژنديان، سهراب ، همكارطرح , احمد نژاد، محدثه ، همكارطرح , دقيق روحي، جواد ، همكارطرح , حقيقي كارسيداني، سميه ، همكارطرح , نظام آبادي، حسن ، همكارطرح , رمضاني عاقله، بابك ، همكارطرح , فئيد، منيره ، همكارطرح , اصغرنيا، مهرداد ، همكارطرح , اميني، معصومه ، همكارطرح , سپهداري، ابوالفضل ، همكارطرح , نجفي، جمال ، همكارطرح , چكمه دوز، فريدون ، همكارطرح , افراز، عليرضا ، همكارطرح , نوري، عباس ، همكارطرح
تنالگان :
سازمان تحقيقات، آموزش و ترويج كشاورزي - موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور
چكيده فارسي :
توسعه پرورش ماهيان گرمابي در كشور همراه با واردات تخم چشم زده، مولدين و ماهيان زينتي و انتقال بچه ماهي و مولدين از استاني به استان ديگر موجب گسترش ناخواسته برخي بيماري ها شده است. بر اساس گزارش شيلات استان گيلان آمار تلفات ماهيان فيتوفاگ در تابستان 1389 نشان دهنده وقوع بيش از 1162 تن تلفات ماهيان فيتوفاگ بوده كه ارزش ريالي آن بيش از بيست و سه ميليارد ريال مي باشد كه اين ميزان حدود 40 ميليارد ريال در سال 1391 محاسبه گرديد(آمار غير رسمي شيلات استان گيلان). همچنين در برخي مزارع تلفات محدود تر ماهيان آمور گزارش مي شود. مجموعه علايم مشاهده شده و شدت تلفات، احتمال وجود بيماري هاي ويروسي مانند ويرمي بهاره كپور، بيماري هرپس ويروسي و بيماري رئوويروسي ماهي آمور را افزايش داد. در تحقيق حاضر ضمن مراجعه به مزارع استان گيلان در زمان بروز تلفات شديد طي فصل پرورش در سالهاي 91-1390، نمونه برداري از 411 قطعه ماهي فيتوفاگ و آمور داراي علايم باليني با محدوده وزني 5 تا 2300 گرم از 83 مزرعه صورت گرفت. علايم باليني در مزارع متفاوت بوده و در خونريزي هاي زير جلدي در پهلوها، پايه باله ها يا دركل باله و قرمز شدن زير شكم و روي سرپوش آبششي، اگزوفتالمي خفيف، خونابه در محوطه شكمي(به رنگ هاي زرد، شفاف يا قرمز) و خونريزي هاي نقطه اي بر روي امعاء و احشاء و بيحالي در ماهيان فيتوفاگ و در برخي موارد زرد يا كمرنگ شدن كامل پوست مشاهده شد و در تعداد كمي از ماهيان آمور علايم خونريزي هاي نقطه اي پوست و احشاء و آسيت(آب آوردگي) در محوطه شكمي و در برخي ماهيان فيتوفاگ و آمور نيزكبد و آبشش كمرنگ مشاهده گرديد. در موارد معدودي حالت تورم و پختگي در عضلات ماهي فيتوفاگ ديده شد. در خصوص بچه ماهيان موارد متعددي از لاغري مفرط مشاهده شد. تفاوت در علايم باليني مي تواند نشانگر وجود علل متفاوت تلفات در مزارع مختلف باشد. رنگ آب در استخرهاي داراي تلفات نيز تفاوت داشته و ازكاملا شفاف تا سبز زيتوني، زرد يا كمي قهوه اي متفاوت بود كه نشان از اختلاف مديريت كلي پرورش از جمله مديريت كيفيت آب مي باشد. حداقل عمق قابل مشاهده با صفحه سكشي در مزارع 40 سانتي متر تا يك متر بود. استخر هايي كه از منبع چاه نيمه عميق يا عميق به عنوان منبع آبي استفاده مي كردند در مقايسه با آنها كه از آب كانال و رودخانه بهره مند بودند تلفات بسيار كمتري داشتند. ميانگين دماي آب، اكسيژن و pH در مزارع به ترتيب °C 31-5/26،mg/L 7/5-3/4 و 38/9-4/7 بود. به منظور بررسي هاي ويروس شناسي، نمونه برداري از اندامهاي داخلي شامل كليه و طحال انجام شد و هوموژن بافت هاي هدف پس از گذراندن از فيلتر 45/0 ميكرون بر روي تيره هاي سلولي EPC و BF2 تلقيح گرديد تا در صورت مشاهده اثرات آسيب سلولي مراحل تاييد تشخيص به كمك روشهاي آنتي بادي درخشان، RT-PCR و PCR انجام شود. در كشت سلولي، آثار تخريب سلولي مشكوك به بيماري SVC پس از تلقيح هوموژن بافتي 3 ماهي فيتوفاگ بر روي تك لايه سلولي EPC بدست آمد ولي در پاساژهاي بعدي علايم آسيب سلولي ايجاد نگرديد. در خصوص نمونه هاي آمور نيز هيچگونه آثار آسيب سلولي بر روي دو تيره سلولي EPC و BF2 ايجاد نشد. در آزمايش آنتي بادي درخشان غير مستقيم نيز كه72 ساعت پس از تلقيح هوموژن بافتي ماهي فيتوفاگ و آمور بر روي تك لايه سلولي EPC انجام شد، هيچگونه واكنشي مشاهده نگرديد. در روش PCR و RT-PCR تمام نمونه هاي فيتوفاگ و آمور از نظر بيماري هاي SVC و KHV و نمونه هاي آمور از نظر وجود بيماري GCRV با استفاده از جفت پرايمر هاي اختصاصي آزمايش شدند. بعلاوه به طور همزمان از كيت هاي تجاري تشخيص SVC و KHV ( IQ2000) استفاده شد. نتايج تمام آزمايشات PCR و RT-PCR حاكي از عدم وجود RNA رابدو ويروس كارپيو ، رئوويروس و DNA هرپس ويروس كوي در نمونه هاي مورد آزمايش بود. به اين ترتيب كه در PCR دستي باند bp 470 مربوط به SVCV، باند bp 292 و باندهاي bp 697 و bp 320 مربوط به GCRV در هيچيك از نمونه ها تاييد نشد و به همين صورت در الكتروفورز محصول PCR مربوط به كيت هاي IQ2000 به ترتيب باندهاي منفي bp 471 و bp 640 مشاهده شد و باندهاي مثبت ايجاد نگرديد. به منظور تاييد نتايج، 3 نمونه مشكوك به آزمايشگاه رفرانس اتحاديه اروپا ارسال گرديد كه هيچيك از بيماري هاي مذكور تاييد نشد. به طور همزمان بر روي نمونه هاي 26 كارگاه آزمايش تشخيص عوامل باكتريايي با كشت از بافت هاي كليه و طحال بر روي آگار خوندار انجام شد. در آزمايشات كشت و بيوشيميايي 21 جدايه آئروموناس هيدروفيلا و 6 جدايه جنس سودوموناس تشخيص داده شد در حاليكه از همان نمونه ها هيچگونه ويروسي تاييد نگرديد. بر اساس نتايج كشت بر روي دو تيره سلولي و آزمايشات PCR، RT-PCR و IFAT حضور عوامل ويروسي SVC، KHV و GCRV در نمونه هاي مورد آزمايش در اين تحقيق تاييد نگرديد و علت تلفات در بسياري از مزارع مربوط به عوامل ويروسي نبوده و با مديريت بهداشتي مزارع قابل كنترل و پيشگيري مي باشد
چكيده انگليسي :
: Warm water aquaculture development along with import of eyed eggs, Broodstocks and ornamental fish also transferring of fingerlings and broodstocks from one province to another one has led to spreading of some unwanted diseases.According to the Gilan Fisheries Department report, mortality rate of silver carp(Hypophthalmichthys molitrix) in the summer of 2010 caused losing of silver carp production more than 1162 tons which was valued over than twenty-three milion rials that was increased to about 40 million rials in 1391.Also grass carp had a less mortality rate in some farms. Observed symptoms and severity of losses increased the probability of viral diseases such as spring viremia of carp, koi herpes virus and grass carp reovirus. In this research, totally 411 silver carp and grass carp with 5 to 2300 gram weight from 83 farms were sampled during 2011-2012. Clinical symptoms was different in various farms and subcutaneous hemorrhages on the flanks, red fin base or total fin and Red belly and operculum, mild exophthalmia, hemorrhaging in the abdominal cavity (yellow, transparent or red fluid) and petechial haemorrhages of skin and viscera and Ascites in abdominal cavity and some silver carps and grass carps were observed with palied liver and gill.In some cases swelling muscle was observed in Silver carp. Several fries with the severe emaciation were observed. Difference between clinical symptoms can indicate the presence of different causes of mortality in different farms. Various water colors from completely transparent to dark green, yellow or slightly brown observed in different pool, which shows the difference in overall culture management including water quality management. The minimum Water turbidity using secchi disk was 40 centimeters to one meter page in the fields. Source semi-deep wells or deep pools that were used as water source. Average water temperature, oxygen and pH in fileds 26/5-31 °C , 4/3-5/7 mg / L and 7/4-9/38. In order to virological surveys, sampling of internal organs, including kidneys, and spleen were done.and Homogeneous target tissues after spending 0/45 micron filter on EPC and BF2 cell line were inoculated to observe cell damage(CPE) in case of confirmation of antibody detection methods brilliant, RT-PCR and PCR done.In cell culture examination, a kind of cell damage (CPE-like changes) was observed after inoculating of 3 samples of Silver carp those were suspected to SVC, but in the second and third passages there were no sign of cell damage.It may be because of toxic effect of tissue filtrate on the cell monolayer. Concerning sample of Grass carp on two EPC and BF2 cells no evidence of cell damage was found. In indirect fluorescent antibody test, 72 hours after inoculation of tissues filtrates of of silver carp and grass carp samples on EPC, no positive reaction was observed. PCR and RT-PCR tests using specific primer pairs were done to test all of the silver carp and grass carp samples for SVC and KHV diseases Also for GCRV in grass carp samples. In addition, simultaneously commercial PCR kits applied for testing of SVC and KHV (IQ2000. Taiwan). The results of PCR and RT-PCR tests showed no evidence of robdovirus Carpio and grass carp reovirus RNA and no sign of koi herpesvirus DNA in tested samples.In conventional PCR and RT-PCR tests Using specific primer pairs none of positive bands related to SVCV(470 bp) and GCRV(292bp, 697bp and 320bp) were not confirmed in the tested samples. Also in electrophoresis of PCR products using IQ2000 kit revealed 471 bp and 640 bp negative bands in all samples and the positive bands were not observed.For confirmation of the results, three suspected samples were sent to Europe union Reference Laboratory and none of mentioned diseases were confirmed. Simultaneously bacteriolocical examination applied for 26 using blood agar. In bacterial culture and related analyzes 6 isolates of Pseudomonas and 21isolates of Aeromonas hydrophila were detected from 26 farms while no virus was confirmed in the same samples.Based on the results of cell culture, PCR, RT-PCR and IFAT tests no one of SVCV, KHV and GCRV viruses were confirmed in tested samples. Therefore, the etiological reason of the mortalities in the tested farms was not viral diseases and should be prevent and control by biosecurity and health management in the farms
كليدواژه :
كپور ماهيان , فيتوفاگ , آمور , بيماريهاي ويروسي , ُُSVC , KHV , GCHV
اطلاعات نشر :
تهران موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور
مشخصات ظاهري :
مصور (بخشي رنگي)، جدول
فروست :
موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 52124
يادداشت :
ص. ع. به انگليسي: Mohaddes Ghasemi. Investigation on probable viral agents associated with grass carp and silber carp mortality in Gilan Province , [همكاران طرح] عيسي شريف پور، جليل ذريه زهرا، مصطفي شريف روحاني، شاپور كاكولكي، مهدي مرادي، شهرام بهمنش، سهراب دژنديان، جواد دقيق روحي، سميه حقيقي كارسيدائي، حسن نظام آبادي، بابك رمضاني عاقله ... , كتابنامه: ص. 74- 77
موضوع :
كپور -- بيمارِيها , كپورماهيان -- بيماريها , كپور نقرهاي - بيماريها , كپور نقرهاي - -- بيماريهاي ويروسي