1779

امكان‌سنجي تهيه كشت سلولي اوليه از بافت‌هاي باله و كليه بچه ماهي سفيد درياي خزر (Rutilus kutum)

قاسمي، محدث

حقيقي كارسيداني ، سميه ، همكارطرح , رمضاني عاقله ، بابك ، همكارطرح , اميدوار، صادق ، همكارطرح , شاهرخي، سوسن ، همكارطرح , طهماسبي، نوشين ، همكارطرح , نصيري، شكوفه ، همكارطرح , پورعباس تحويلداري، ناهيد ، همكارطرح , رضواني گيل كلائي، عليرضا ، همكارطرح , صفوي، ابراهيم ، همكارطرح , توكل، عباس ، همكارطرح

1399

وزارت ﺟﻬﺎد ﮐﺸﺎورزي - ﺳﺎزﻣﺎن ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت، آﻣﻮزش و ﺗﺮوﯾﺞﮐﺸﺎورزي - ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر

كشت سلول اين امكان را فراهم مي آورد تا تغييرات و آثار آسيب سلولي در محيط كنترل شده مورد بررسي قرار گيرند. در اين مطالعه كه در سال 1396 انجام شد امكان تهيه كشت سلول اوليه از باله و كليه ماهي سفيد درياي خزر(Rutilus kutum) به دو روش كاشتن(Explant) با دو تيمار (تيمار با آنزيم و بدون آنزيم تريپسين) و جداسازي آنزيمي با دو تيمار(استفاده و بدون استفاده از همزن مغناطيسي) مورد بررسي قرار گرفت. بدين منظور پس از طي مراحل شستشو و ضدعفوني، سلول ها در محيط كشت L-15 حاوي20 درصد سرم جنين گوساله و آنتي بيوتيك در فلاسك هاي كشت سلول cm2 25 كاشته شدند. در روش آنزيمي با استفاده از همزن قطعات بافت با ظرفي حاوي تريپسين بر روي استيرر قرار گرفته ولي در روش بدون همزن قطعات بافت بر روي استيرر قرار نميگرد، در انتها در هر دو روش بافت ها سانتريفيوژ شده و در فلاسك هاي كشت سلول كاشته مي شوند. سپس بعد از گذشت 7 الي 10 روز زماني كه سلول ها 70 درصد كف فلاسك را پوشاندند در هر دو روش اقدام به پاساژ سلول ها گرديد، سلول ها توسط 3 سي سي آنزيم تريپسين از كف فلاسك جدا شدند و پليت سلولي حاصل به فلاسك كشت جديد منتقل شد. در مقايسه كلي بين روش هاي توليد كشت اوليه، روش جداسازي آنزيمي توسط آنزيم تريپسين با استفاده از همزن مغناطيسي موفق تر بود و نتايج نشان داد شرايط بهينه براي كشت اوليه سلولهاي باله و كليه ماهي سفيد محيط كشت L-15 به همراه 20 درصد سرم جنين گوساله، pH ، 2/7 و دماي 24 درجه ي سانتي گراد مي باشد. تا كنون 12پاساژ از سلول هاي باله ماهي سفيد انجام شده و سلول ها از رشد خوبي نيز برخوردار هستند. با توجه به تكثير و پاساژ مناسب سلول هاي بدست آمده مي¬توان از اين كشت سلولي براي تحقيقات ويروس شناسي، سم شناسي و ايمني شناسي استفاده كرد، اما سلول هاي كليه علي رغم مهاجرت سلول 37/88 درصد، تا 5 پاساژ تكثير شدند و پس از آن تكثير مناسبي صورت نگرفت.

Abstract: Cell culture method allows investigating of the cytopathic effects and cell changes in controlled environments. In this study, preparation of primary cell culture from the Caspian Kutum (Rutilus kutum) was investigated by explantation method with two trials (with and without trypsin treatment) and enzymatic disaggregation with two trials (with and without using Magnetic stirrer). For this purpose, after washing and disinfection steps, tissue particles were explanted and the cells derived from fin and kidney of kutum were seeded in L-15 medium containing 20% Fetal Bovine Serum and antibiotic in 25 cm2 cell culture flasks. After 7-10 days, the cells were passaged when they covered 70% of the bottom of the flask and the cells were separated from the flask by 3 cc trypsin enzyme then were transferred to a new culture flask. However it was concluded that enzymatic disaggregation using the Magnetic stirrer was the most efficient technique to isolate cells and develop confluent cultures. The highest growth was obtained in L-15 medium with 20% Fetal Bovine Serum, pH 7.2 and 24 ° C. So far, 12 passages have been performed and the cells have been well developed. Due to the proper proliferation and passage of the cells, this cell culture can be used for virology, toxicology and immunology research. But the kidney primary cells in spite of the 5 passages did not continue normal growth and their cultivation were stopped.

كشت سلول اوليه , باله , كليه , ماهي سفيد درياي خزر

تهران ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر

مصور، جدول، نمودار

موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 58227